インタクトタンパク質とサブユニットの分析

Agilent オンライン LC モニタリングソフトウェアを使用すると、mAb の製造や精製におけるプロセス管理用 Agilent InfinityLab オンライン LC ソリューションにより、自動ハートカット 2D-LC を制御できます。この例では、一次元目のプロテイン A 分離を使用して mAb の抗体価を定量しました。二次元目では、カラムスイッチングバルブを用いて SEC と IEC カラムを切り替え、mAb の HMW 凝集体と電荷変異体の分布を分析しました。アジレントのソフトウェアは、一次元目および二次元目のすべての結果をほぼリアルタイムで、一目で確認できるように表示することにより、時間とコストの節約を実現します。

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NISTmAb の関連するすべての還元起因 LMW 種を分離できる RPLC メソッドについて探求できます。Agilent 1290 Infinity II Bio LC システムでは、重鎖および軽鎖のフラグメントの分析で、優れたリテンションタイムと面積精度値を実現しました。Agilent 1290 Infinity II Bio マルチサンプラでの NISTmAb の動的な還元とそれに続く 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF による検出により、翻訳後修飾を分析するこのメソッドの可能性が示されました。

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近年、微小液滴の反応を利用した抗体分析に注目が集まっています。微小液滴反応による抗体の特性解析の利点は、ESI スプレーチャンバで得られる高速の反応速度（マイクロ秒単位）と高い反応収率です。Agilent Jet Stream ESI イオン源を用いた 2 つの反応（IdeS 切断とジスルフィド結合還元）において、NIST IgG1 mAb を使用して微小液滴反応の条件を最適化しました。最適化条件を複数の市販の抗体に適用し、条件の堅牢性と幅広い適合性を検査しました。実験では予想どおりの結果が得られ、時間の短縮に加えて、特性解析用の酵素と抗体の消費量削減により、分析コストを大幅に抑えることができました。この最適化されたワークフローは「フラッシュ特性解析」と呼ばれています。

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蛍光検出は、よりクリーンで安定したベースラインを提供して、データの解釈を容易にすると同時に、結果の明瞭性と感度を向上させるため、タンパク質分析において有用なメソッドです。Agilent ProteoAnalyzer System による蛍光検出を、業界標準の NIST モノクローナル抗体（NISTmAb）の詳細な分析により、従来の UV 検出と比較評価しました。両検出メソッドともに、主な単量体ピークおよび関連する不純物を含む、主要な分析特性を確実に同定して分離しました。単量体純度、グリカン占有率、チオエーテルの割合などの定量指標は、両プラットフォーム間で高い一致性を示しました。

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