抗体薬物複合体（ADC）は、生物学的に活性のある細胞毒性（抗がん剤）ペイロードまたは薬物と結合した抗体で構成される複雑な分子です。抗体薬物複合体は、副作用を抑制して他の化学療法剤よりも広い治療濃度域を提供するように機能する、生体複合体および免疫複合体の例です。ADC は、各抗体に結合する薬物分子の数にばらつきがあるため、本質的に不均一です。抗体薬物複合体の特性解析および薬物抗体比（DAR）のモニタリングはきわめて重要です。アジレントは、InfinityLab Bio LC ポートフォリオ、バイオカラム、LC/MS、ソフトウェアを含む、抗体薬物複合体の分析のためのワークフローソリューションの包括的なポートフォリオを提供します。
自動化されたサンプル前処理により、血清からの ADC の精製および生体内変化分析のための ADC の前処理に必要な時間と労力を大幅に削減します。
抗体薬物複合体およびその他の生体分子を SEC および HIC クロマトグラフィー技術で特性解析するための完全なワークフローソリューション。
ADC の特性解析と DAR 分析は、薬物の安全性と効能を確保するためにきわめて重要です。ただし、ADC に不均一性があるため、これは困難でもあります。安定性と分解の問題に加え、規制要件が厳格であるため、複雑さが増しています。 アジレントは、事前に最適化されたプロトコルを備えた Agilent AssayMAP Bravo 自動サンプル前処理を含む包括的なワークフローにより、分析の簡略化と再現性の向上を支援します。
抗体薬物複合体（ADC）の薬物複合化部位同定のための実証済みワークフローをご覧ください。このワークフローでは、Agilent AssayMAP Bravo Protein Sample Prep Platform、Agilent 1290 Infinity III Bio LC システム、Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF システム、および Agilent MassHunter BioConfirm ソフトウェアを使用します。リジン結合型アド‑トラスツズマブエムタンシン（T-DM1）サンプルにおいて、26 種類の複合化部位が高い信頼性で同定されました。また、結果は、卓越した質量精度と一貫した再現性も示しました。
二次元液体クロマトグラフィー/四重極飛行時間型質量分析（2D-LC/Q-TOF）アプローチを用いて、Agilent 1290 Infinity III Bio 2D-LC システムおよび Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF システムにより、ADC サンプル中の遊離薬物含有量を適切に同定します。このメソッドは、一次元目（1D）でのサイズ排除クロマトグラフィー（SEC）と、二次元目（2D）での逆相（RP）分離を組み合わせたものです。このメソッドにより、手動によるタンパク質変性沈殿処理を行わずに、ADC 中の遊離薬物含有量を高感度で容易に分析することができます。
アジレントの包括的なワークフローを用いて、サル血漿中のブレンツキシマブベドチンのタンパク質およびペイロードの両成分の安定性を定量的に評価します。このプロセスでは、Agilent AssayMAP Bravo Automated Liquid Handling Platform を利用して、生体マトリックスから薬物分子を効率的に精製します。次に、精製したサンプルを、Agilent 1290 Bio LC システムと Agilent 6495 トリプル四重極 LC/MS を組み合わせて分析し、タンパク質およびペイロードの濃度を正確に測定します。薬物の各成分の時間的安定性を理解することは、医薬品設計の最適化と臨床結果の改善に不可欠です。このワークフローは、抗体薬物複合体の研究開発を支援する、堅牢で完全に統合されたソリューションを提供します。
分析の代表的な有機溶媒および酸性溶媒の条件下で ADC が分解される傾向を克服する、新しい 2D-LC アプローチによる DAR 測定をご紹介します。このメソッドでは、HIC、マルチハートカット（MHC）、その後のサイズ排除クロマトグラフィー（SEC）による脱塩および分離をオンラインで、ネイティブ MS 分析とともに使用します。このワークフローでは、Agilent 1290 2D-LC システム、Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF、および Agilent MassHunter BioConfirm ソフトウェアも使用します。このネイティブ MS 分析メソッドを使用すると、ADC サンプルに対して高精度の平均 DAR 値が得られるだけではなく、クロマトグラフィーによる優れた分離を実現でき、インタクトネイティブ構造が保持され、さまざまな DAR のすべての ADC に対して、高い精度のインタクト質量測定を実行できます。
疎水性相互作用クロマトグラフィー（HIC）においてイソプロパノールなどの有機溶媒の添加は、疎水性抗体薬物複合体（ADC）の保持力を低下し、選択性を調整するための重要なパラメータになることがあります。ブレンツキシマブベドチンの薬物抗体比（DAR）を、3 番目のチャネルの有機溶媒としてイソプロパノールを使用した、3 成分グラジエントにより測定しました。Agilent 1260 Infinity III Prime Bio LC を使用することにより、高塩含有バッファと有機溶媒という困難な組み合わせにおいても、優れた再現性が得られました。
アジレントは、分析に適したカラム、標準、試薬、消耗品を簡単にお選びいただけるオーダーガイドとセレクションツールをご用意しております。アジレントは、お客様が必要とする分離能と性能を得られるようお手伝いします。
分析を簡略化して、確実な意思決定を支援します。抗体薬物複合体分析の戦略を最適化するのを支援するために、アジレントの専門家がよく寄せられる質問にお答えします。
液体クロマトグラフィー（LC）戦略
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DE-010647
DAR を測定することは、ADC の効能、薬物動態、毒性を評価するうえで不可欠であるため、正確さが重要になります。DAR を正確に決定するには、異なる複合化状態の分離と検出が必要になります。インタクト ADC およびサブユニットでは、Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF が高分解能の質量データを提供し、Agilent MassHunter BioConfirm ソフトウェアが、デコンボリュートしたスペクトルからの DAR の計算を自動化します。
疎水性相互作用クロマトグラフィー（HIC）を用いて、DAR 種を分離することができます。Agilent 1290 Infinity III Bio LC システムと Agilent AdvanceBio HIC カラムを使用することにより、疎水性に基づいて DAR 種を分離することができます。さらに、Agilent OpenLab CDS ソフトウェアと BioConfirm ソフトウェアを使用することにより、グラジエント最適化と温度制御を管理できます。BioConfirm ソフトウェアを OpenLab CDS と統合することにより、ピーク積分と DAR の計算をサポートします。
ADC は、複合化部位、ペイロード、リンカーケミストリが変化しやすいため不均一であり、その特性解析には、異なる DAR 種、電荷変異体、凝集体の分離と同定が含まれます。DAR は、逆相 LC/MS、または AdvanceBio HIC カラムと UV 検出を用いて測定することができます。電荷変異体および凝集体の分析は、一般的に LC/UV メソッドを用いて実施されており、それぞれ Agilent Bio mAb 弱カチオン交換カラムまたは Agilent AdvanceBio SEC カラムが使用されます。高分解能クロマトグラフィー分離には、Agilent 1290 Infinity III LC システムを使用することができ、6545XT LC/Q-TOF が正確な質量同定を実現します。Agilent MassHunter Qualitative Analysis や BioConfirm などのソフトウェアツールが、スペクトルアノテーションや変異体プロファイリングをサポートします。
再現性は、規制遵守と品質管理においてきわめて重要であるため、複数のバッチを生産する際には、Agilent AssayMAP Bravo Platform を用いた自動サンプル前処理により、ばらつきを最小限に抑えます。1290 Infinity III Bio LC システムは、一貫したクロマトグラフィー性能を保証しており、OpenLab CDS ソフトウェアは、QC 環境向けにメソッド標準化、監査証跡、バッチ比較ツールをサポートしています。
ペプチドマッピングは、複合化部位を同定して、リンカー付加を検証します。酵素消化後に、Agilent 1290 Infinity III Bio LC システムと 6545XT LC/Q-TOF を用いた LC-MS/MS 分析を実施することにより、高感度で良好な配列カバー率が得られます。Agilent Altura ZORBAX Eclipse Plus C18 カラムは、ウルトライナートテクノロジーで最適な分離を実施することにより、ピーク形状、PTM の分離、分析対象物の回収率を向上させます。自動ペプチド同定および複合化部位特定には、MassHunter BioConfirm ソフトウェアが優れた性能を発揮します。アジレントのペプチドマッピングソリューションの詳細は、こちらでご確認いただけます。
遊離ペイロードには潜在的な毒性があるため、モニタリングする必要があります。Agilent Captiva EMR-Lipid または Agilent Bond Elut SPE カートリッジを用いたサンプルクリーンアップにより、マトリックス除去が改善されます。定量は、フェムトモルレベルの感度を備えた Agilent 6495D トリプル四重極 LC/MS を用いて実施することができ、MassHunter Quantitative Analysis ソフトウェアは、検量線作成とバッチ処理をサポートします。
ネイティブ MS は、非共有結合相互作用を保持し、ADC の構造と凝集に関する知見を提供します。Agilent 1290 Infinity III Bio LC および 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF は、ネイティブ SEC-MS ワークフローをサポートします。また、AdvanceBio SEC カラムと揮発性緩衝液（酢酸アンモニウムなど）を使用することにより、ネイティブ条件を維持することができます。さらに、BioConfirm のデコンボリューションツールにより、インタクト種の質量測定と DAR の測定が可能です。アジレントのネイティブ MS ソリューションに関する詳細をご覧ください。
CE は、翻訳後修飾や複合化に起因する電荷変異体の分離に有効です。Agilent 7100 CE システムは、電荷プロファイリングのための icIEF/MS メソッドをサポートします。
Agilent 1260 Infinity III Bio LC マルチ検出器システムと AdvanceBio SEC カラムを用いたサイズ排除クロマトグラフィー（SEC）により、凝集体の定量が可能になります。マルチ検出器の設定（UV、MALS、RI）により、分子量およびサイズ分布データが得られ、OpenLab CDS ソフトウェアでは、安定性試験の自動化と追跡が可能です。アジレントの凝集体分析ソリューションに関する詳細をご覧ください。
大規模な ADC ライブラリの迅速な解析を必要とする初期段階のスクリーニングでは、Agilent RapidFire 400 MS システムが、超高速 LC/MS 分析を 10 秒未満のサイクル時間で実現します。また、MassHunter ソフトウェアと組み合わせることにより、自動化されたデータ取り込みと処理をサポートします。さらに、AssayMAP Bravo Platform は、複合化および精製ワークフローのためのサンプル前処理を自動化して効率化します。
サンプル前処理では、マトリックス干渉を除去しながら、ADC の完全性を維持することがきわめて重要であるため、信頼性の高いソリューションが必要になります。血清/血漿のクリーンアップには Agilent Captiva ND 脂質プレートを、ペイロード抽出には Bond Elut SPE カートリッジを使用できます。最高レベルの再現性とスループットを実現するには、Bravo による自動化が最適です。
規制機関への申請にバリデーション済みメソッドとトレース可能なデータが含まれることを保証するために、OpenLab CDS および Agilent MassHunter ソフトウェアは、電子署名、監査証跡を提供することで、CFR Part 11 への準拠を可能にします。メソッドバリデーションツールには、システム適合性チェック、検量線管理、自動レポート作成が含まれます。
微量種を検出するには、高い感度と低いバックグラウンドノイズが必要です。これを実現するには、アジレントの革新的な iFunnel 技術を搭載した 6495D トリプル四重極 LC/MS を使用して、イオン透過と検出限界を向上させます。MS グレードの溶媒は、バックグラウンドを低減して S/N 比を向上させます。また、溶媒インレットフィルタ付きの Agilent InfinityLab Bio 溶媒ボトルを使用することにより、システム内のナトリウムを低減できます。これにより、イオン化が改善されて付加物が減少するため、MS データの解釈が容易になります。
データを統合することにより、トレーサビリティと意思決定が向上します。Agilent OpenLab ECM XT ソフトウェアは、一元化されたデータ保存、バージョン管理、LIMS 接続を実現します。また、メタデータのタグ付け、自動アーカイブ、チーム間および規制機関との安全な共有をサポートします。
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