タンパク質医薬品は不均一な性質のために、広範な分析特性解析が要求されます。ペプチドマップは、タンパク質や複数の処理で得られる最終生成物のフィンガープリントで、分析対象のタンパク質を包括的に理解することができます。ペプチドマッピングは、タンパク質の分離精製、ペプチド結合の選択的切断、ペプチドのクロマトグラフィー分離、有効な手法によるペプチドの分析という 4 つの主要手順で構成されます。タンパク質同定とペプチド特性解析には、一般的に 2 つの方法が使用されます。
アジレントは、システム、消耗品、ソフトウェア、サービスの幅広いポートフォリオによりペプチドマッピングを自動化および簡素化し、ペプチド配列やその PTM の完全で高感度な測定を実現しています。
ペプチドマッピング用のサンプル前処理は複数ステップで構成されるプロセスであり、時間と手間がかかる場合があります。Agilent AssayMAP Bravo プラットフォームは、タンパク質とペプチドの自動的な特性解析および定量ワークフロー（ペプチドマッピング、翻訳後修飾など）に最適な、すぐに使用できるサンプル前処理ソリューションです。
自動化により、サンプル前処理のばらつきが減少し、ワークフローの再現性が向上するため、作業時間をより有効に活用できます。
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詳細情報：AssayMAP Bravo の基礎
アジレントは、分析に適したカラム、標準、試薬、消耗品を簡単にお選びいただけるオーダーガイドとセレクションツールをご用意しております。アジレントは、お客様が必要とする分解能と性能を得られるようお手伝いします。
ペプチドマッピングおよび PTM 分析用のカラムセレクタツールを使用する
ペプチドマッピングはバイオ医薬品業界に不可欠です。サンプルが複雑であるため、高分解能と堅牢なペプチドマッピングメソッドの重要性が増しています。このアプリケーションノートでは、Agilent 熱平衡化デバイス（TED） と Agilent 1290 Infinity II Bio LCの組み合わせで実現できる、高温での分解能と堅牢性について説明します。
The Agilent 1290 Infinity II Bio LC と Agilent 6495 トリプル四重極 LC/MS システムは、ペプチドの定量分析に最適なプラットフォームです。リガンド結合アッセイ（ligand binding assay：LBA）/LC/MS のハイブリッドワークフローは両方の技術の利点を組み合わせたもので、アッセイの感度と再現性が非常に優れています。このアプリケーションノートでは、高感度な LBA/LC/MS ハイブリッドワークフローを用いた、生体マトリックスからのトラスツズマブサロゲートペプチドの定量分析について説明します。このワークフローのもう 1 つの利点は、汎用性と特異性が高く、その他の多くの mAb 治療薬に適用できることです。またメソッド開発時間が非常に短いため、創薬と医薬品開発に最適です。
Bio 2D-LC/Q-TOF MS を用いたペプチド/タンパク質関連不純物の分析について説明しています。両方の分離手法（2D-LC と MS）の組み合わせにより、ピーク純度の包括的な情報を取得できました。この分析プラットフォームの操作において重要なのは、2D-LC 用の Agilent MassHunter ソフトウェアです。このソフトウェアには、これらの実験の直感的/視覚的なプログラミング用の高度なアルゴリズムが組み込まれています。
グルタミンとアスパラギンの脱アミド化は、タンパク質に影響を与える最も一般的な分解の 1 つです。ただし、質量分析による脱アミド化の分析は、未修飾型に対するマスシフトが 1 Da 未満と小さいために困難です。部位特異的な脱アミド化の測定には、LC/MS 分析の前のプロテアーゼ消化がよく使用されますが、未修飾型と脱アミド化型がクロマトグラフィー分離されなければ、この方法も失敗する可能性があります。
電荷表面を持つ Agilent AdvanceBio ペプチドプラス逆相 C18 カラム を使用すれば、脱アミド化ペプチドとその未修飾変異体の分離度が劇的に向上します。また移動相の最適化によって、これらの成分の分離度をさらに制御しやすくなる可能性があります。
これまで、UV 検出を用いたクロマトグラフィーによるペプチド分離には、C18 逆相 HPLC カラムと、イオンペア試薬としてのトリフルオロ酢酸（TFA）を含む移動相が使用されてきました。ただし、TFA を使用すると分解能は向上しますが、質量分析（MS）信号が抑制される場合があります。ギ酸（FA）は MS 検出に適したイオンペア試薬ですが、従来の多くの C18 カラムでは、最適な分離結果が得られない場合があります。このアプリケーションノートでは、で MS 対応の FA を移動相調整剤として使用して、合成ペプチドの不純物を分離する方法について説明します。
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ペプチド同定に関するアプリケーションノート
ペプチド定量に関するアプリケーションノート
治療用合成ペプチドの分析に関するアプリケーションノート
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