細胞治療の研究開発を効率化
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細胞治療薬の開発により、がん、自己免疫疾患、および感染性疾患に対する有望な新療法が生み出されました。T 細胞、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージなどの免疫細胞は、改変後に増殖、選択され、個体に投与されます。また、幹細胞治療では、あらゆるタイプの細胞に分化可能な未分化の、自己再生可能な細胞が使用されます。細胞治療の標的となる幹細胞には、多能性幹細胞、成体幹細胞、がん幹細胞などがあります。
ところが、これらの「生きた」治療は複雑なため、臨床的有効性をより正確に予測するには、治療薬の特性を幅広く測定する必要があります。したがって、細胞製造ワークフローを標準化するには、創薬の初期段階で製品を包括的に特性解析することが重要です。アジレントには、細胞の作用機序、特異性、効力、表現型、および細胞運命を調査するための幅広い技術を紹介します。これらの技術を活用することで、創薬からプロセス開発までのあらゆる段階で、関連する重要品質特性（CQA）を明らかにし、細胞治療薬が安全基準および効能基準を満たしていることを確認できます。
適切な技術があれば、細胞ヘルスについてより深い洞察が得られます。単純なアッセイから自動化されたマルチパラメータ 3D 細胞モデルまで、お客様の目標達成に有効な技術をお選びください。
免疫表現型解析、活性化、増殖、3D 腫瘍スフェロイド、効能アッセイなど、細胞治療の詳細な特性解析のためのツールに関する情報をご覧いただけます。
Robust and consistent processes are needed to ensure quality, safety, and purity during cell therapy process development and manufacturing.
細胞編集、免疫表現型解析、改変された免疫細胞を最適化するためのハイスループットスクリーニングの革新的なソリューションについて詳しくご覧いただけます。アジレントでは、操作された免疫細胞の活性化、効能、疲労、および代謝表現型を評価し、細胞の運命や適応度、機能を判断するための実績あるソリューションをご用意しています。
より有効性の高い免疫細胞治療の開発に向けた科学的ブレークスルーを後押しします。
フローサイトメトリは、免疫細胞のさまざまなサブポピュレーションを詳細に分析し、免疫システムを包括的に評価できる強力な手法です。スペクトルフローサイトメトリーにより性能が向上し、より多くのマーカー、より高い柔軟性、より優れたデータ分解能をサポートできるようになりました。
このアプリケーションノートで紹介する研究では、Agilent NovoCyte Opteon スペクトルフローサイトメーターで末梢血単核細胞（PBMC）サンプルにおける免疫細胞の分布を分析するために、45 色スペクトルフローサイトメトリパネルを設計しました。
インピーダンスベースのアッセイでは、ある期間にわたる細胞溶解をラベルフリーでリアルタイムモニタリング（標的細胞の脱離として測定）できます。また、治療効能の動的モニタリングにより、異なる細胞やコンストラクト間での細胞毒性の経時変化を、複数の E:T 比条件下で比較することができます。これは、ほかのアッセイにはない大きな利点です。アッセイの性質上、数日間にわたるモニタリングが可能なため、非常に低い E:T 比（0.05:1～10:1 の範囲）が適しています。
Agilent xCELLigence RTCA eSight を使用すると、効能の指標として CAR-T によるがん細胞の細胞媒介殺傷を生細胞イメージングとインピーダンスにより継続的にモニタリングできます。その具体的な方法をご覧いただけます。
酵素免疫スポットアッセイ（ELISpot）は、細胞から放出される分泌タンパク質を検出することにより、生体外細胞免疫応答を単一細胞レベルでモニタリングできる高感度アッセイです。Agilent BioTek Cytation 7 細胞イメージング・プレートリーダーは、比色分析 PVDF メンブレンを用いた ELISpot アッセイの解釈に最適なプラットフォームです。このイメージングシステムでは、2 倍、4 倍、8 倍の顕微鏡対物レンズを使用したデジタル形式のトップダウンカラーイメージングが可能です。2 倍の対物レンズではウェル全体を 1 つの画像で捕捉できるため、96 ウェルの ELISpot 測定に最適です。また、銀染色 ELISpot アッセイ用の反転カメラを使用することにより、明視野イメージングにも対応できます。イメージングおよび顕微鏡用の Agilent BioTek Gen5 ソフトウェアを使用すれば、分析前にモンタージュ画像タイルを自動的につなぎ合わせ、バックグラウンドを除去し、ウェル外の領域をマスキングできます。
T 細胞は、活性化およびエフェクタ細胞やメモリ細胞への分化時に、その代謝表現型に一連の変化が起こります。この変化は、T 細胞の機能を維持するうえで非常に重要になります。CAR-T 治療およびその他の養子 T 細胞治療の代謝シグネチャの測定は、T 細胞の持続性と抗腫瘍機能を明らかにするうえできわめて重要な役割を果たします。Agilent Seahorse XF Pro アナライザおよび Agilent Seahorse XF Pro アナライザ用 T 細胞代謝プロファイリングキットを使用することで、T 細胞集団における解糖活性およびミトコンドリア活性の堅牢な測定値をミトコンドリア呼吸能と組み合わせて同時に採取できます。その具体的な方法をご覧いただけます。
幹細胞の機能に関する知識を深め、細胞のリプログラミングと分化に関わるメカニズムを明らかにします。
多能性 hMSC から軟骨細胞などの最終的なターゲット系列に完全に分化するまでに、通常 14～28 日間かかります。2～3 日ごとに培地を交換する必要がありますが、手動プロセスでは手間がかかるうえ、未接着の細胞を扱う際に誤ってスフェロイドを除去してしまうリスクが高まります。この処理ステップを自動化し、3D 磁気バイオプリンティング法を組み入れることで、これらの作業から解放され、ほかの業務に取り組むことができます。また、スフェロイドの損失リスクが最小限またはゼロになり、再現性が向上します。Agilent BioTek Cytation 細胞イメージング・マルチモードプレートリーダー、BioTek BioSpa 8 全自動インキュベーター、および BioTek EL406 ウォッシャー・ディスペンサーを用いた堅牢なメソッドなら、簡単な操作で hMSC スフェロイドの作製および分化プロセスを最適化できます。
前臨床研究用の MSC を作製するには、ドナーの細胞を in vitro で継代培養する必要があります。ただし、連続的な継代培養により、増殖速度が低下して分化能が損なわれ、ドナーから次のドナーへと進むごとに機能的容量に高いばらつきが生じる可能性があります。そのため、増殖プロセスの最中および後に細胞の機能を評価することが非常に重要になります。細胞間の一貫性が損なわれ、品質管理用の標準物質がなければ、正確な結果が得られないか結果を正しく解釈できない可能性があります。‑‑このアプリケーションノートでは、Agilent xCELLigence リアルタイム細胞分析解析（RTCA）機器を使用したラベルフリーアッセイについて取り上げています。この非侵襲的メソッドにより、生理学的に関連性の高い条件下で細胞の状態を継続的にサンプリングできます。また、データから複数の定量パラメータを導き出し、BMSC を特性解析して細胞の効能と機能を推定し、それを前臨床の品質管理評価のためのツールとして利用できます。
500 µm マイクロホールのハンギングドロップ式デバイスと 6 ウェルプレートが、下流の組織形成アプリケーションで用いる多数のヒト間葉系幹細胞スフェロイドの作製プロセスを簡略化する信頼できる手段になります。幹細胞の分化は、スフェロイドがインサート内にある間も実行できます。RAD モジュール搭載の Agilent BioTek MultiFlo FX マルチモード・ディスペンサーによる自動液体分注を組み入れることで、一貫した細胞懸濁液の分注を高い再現性で達成し、ほぼ同サイズのスフェロイドの作製量を増やすと同時に、手動処理にかかる時間を短縮できます。その後、最終的な下流アプリケーションへの組み込み前に、明視野および蛍光イメージング機能を使用すれば、幹細胞および分化マーカーの定性および定量評価に加え、ハンギングドロップ式インサート内のスフェロイドのカイネティクスをリアルタイムにモニタリングできます。
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