Agilent AdvanceBio SEC タンパク質標準試料、300 Å | Agilent AdvanceBio SEC タンパク質標準試料、130 Å | |||||
タンパク質/ペプチド | MW | タンパク質/ペプチド | MW | |||
1. | チログロブリン | 670,000 | 1. | オブアルブミン | 45,000 | |
2. | γ-グロブリン | 150,000 | 2. | ミオグロビン | 17,000 | |
3. | オブアルブミン | 45,000 | 3. | アプロチニン | 6,700 | |
4. | ミオグロビン | 17,000 | 4. | ニューロテンシン | 17,00 | |
5. | アンギオテンシン II | 1,000 | 5. | アンギオテンシン II | 1,000 |
SEC では、多様なサイズのサンプル成分の性能に基づき、さまざまな程度で分子が固定相のポアの内外を移動します。サンプルと固定相との間で分子間の相互作用がない状態が最適です。大きい分析対象物は、小さい分析対象物のようにポアに十分に入り込むことができないため、ポア内に留まる時間が短くなり、カラムから早く溶出します。小さい分析対象物は、ポアに効率的に入り込むことができるため、ポア内に留まる時間が長くなり、カラムから溶出するのが遅くなります。
SEC ポアサイズは分子量との相関関係から、球状タンパク質およびペプチドの排除限界と浸透限界点を定義するのに使用されています。ただし、最適なポアサイズを決定するのは、最終的には分析成分の流体力学半径です。AAV、VLP、オリゴヌクレオチド、LNP など、次世代の生物製剤の場合、確立されたポアサイズガイドラインに対して、分子量が十分に関連付けられていません。同じ分子量のオリゴヌクレオチドははるかに細長く、AAV はよりコンパクトです。
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