PfuTurbo Cx Hotstart DNA Polymerase [RUO]

PfuTurbo Cx ホットスタート DNAポリメラーゼ

  • 高い正確性と高い信頼性を兼ね備えたDNAポリメラーゼ 
  • 難しいPCRに最適
  • 汎用性が高く、多様なPCR条件下での仕様が可能
  • PfuTurbo DNAポリメラーゼと同等の正確度
  • 特異性の高いホット・スタート仕様
  • dUTPを使用したUNGコンタミネーション防止プロトコール

PCR カタログ (英語、5991-9020EN）

掲載の製品はすべて試験研究用です。診断目的にご利用いただくことはできません。

関連情報リンク

トラブル・フリー！高フィデリティPCR性能

PfuTurbo Cx hotstart DNA polymerase*は、Pfu DNA polymeraseを改変した酵素で、高フィデリティ仕様でありながら、トラブル・フリーのPCR性能を備えています。通常、PCRの反応が進むにつれ、dCTPが脱アミノ化されて生じるdUTPが蓄積していきます。DNA鎖にdUTPが取り込まれると、Pfuをはじめとする校正機能をもつ古細菌性のDNAポリメラーゼの活性が阻害され、増幅効率が低下します。PfuTurbo Cx hotstart DNA polymeraseはテンプレート内にdUTPが存在しても失速することなく複製を持続しますので、増幅効率の低下が起こりません。

新しい Pfu 変異体がPCR阻害を克服

古細菌由来のプルーフリーディングPCR酵素には、酵素がテンプレート中でウラシルに出会った場合に失速するという特徴があり、高い正確性をもたらす要素のひとつと考えられています。PCRサイクル中の高温での加熱により、テンプレートやヌクレオチドでシトシンからウラシルへの脱アミノ化現象が生じます。DNAでのdCMPからdUMPへの脱アミノ化はDNAへの変異をもたらしうる現象であり、DNA複製の前に修復されなければ G-C から A-Tに変える 突然変異がおこってしまいます。Pfu は鋳型鎖において複製がウラシルへ及ぶ4つ前の塩基で複製を停止することで突然変異を防止しています1。PCR中にこの現象が起きた場合は、PCR poisoning と呼ばれます。ウラシル残基のために失速すること自体は古細菌性のDNAポリメラーゼの正確性の高さに貢献しているにも関わらずPCR poisoning と呼ばれているのは、PCR産物の収量の低下や、長いターゲットの増幅効率の低下につながるためです2。

PfuTurbo Cx ホットスタート DNAポリメラーゼは、テンプレート中に位置する、もしくは伸張中のDNA鎖に組み込まれているウラシルで失速せずに増幅を続けることが可能ですので、PCR poisoningを完全に克服しており、信頼度が高く、使いやすい酵素となっています。また、GCリッチや5～10 kb の長さなどの難しいテンプレートから増幅する場合でもより多くの収量を得ることができます。ほとんどの場合、添加物をいれずに増幅が可能ですが、より長い、もしくは特に問題の多い配列で収量を向上させるするためにDMSOが PfuTurbo Cx ホットスタート DNAポリメラーゼと共に含まれています。

多様なPCR条件に適応

多くのプルーフリーディング酵素とは異なり、PfuTurbo Cx ホットスタート DNAポリメラーゼはほとんど最適化を必要とすること無く、多様なPCR条件下でも高い活性を示します。PfuTurbo Cx DNAポリメラーゼは幅広い鋳型濃度に対応し、わずか1 ngのヒト ゲノムDNAや、逆に通常はプルーフリーディングDNAポリメラーゼを阻害する多量 (>500 ng)の鋳型 からでも増幅可能です。また、通常ハイフィデリティ酵素に必要とされるよりも短い伸張時間で使用することも可能です。

パフォーマンスのためにフィデリティを犠牲にしません

プルーフリーディング ポリメラーゼは突然変異のキャリーオーバーを防ぐために失速しますが、この失速を防ぐミューテーションは正確性の低下につながる可能性があります。当社ではより高い正確性を維持しながら失速を防ぐために研究を重ね、PfuTurbo DNAポリメラーゼと同じレベルのフィデリティを示す 突然変異体の作出に成功しました。

ホットスタート仕様で特異性を向上

PfuTurbo Cx ホットスタート DNAポリメラーゼはサイクルが始まるまでポリメラーゼとエキソヌクレアーゼの活性が抗体を用いて阻害されており、高い特異性と低いバックグラウンドを実現しています。このホットスタート仕様は、ハイスループットあるいは標的が多岐にわたる実験系に最適です。PfuTurbo Cx ホットスタート DNAポリメラーゼは、ゲノムDNAなどの複雑なテンプレートからの低コピー数の標的を検出可能です。また、サーマルサイクルの前に室温で長い時間インキュベーションする必要がある場合にも適しています。PfuTurbo Cx ホットスタート DNAポリメラーゼはサイクル条件を変更せずにPCRプロトコールへ取り入れることができます。

キャリーオーバー・コンタミネーション防止プロトコール

PfuTurbo Cx hotstart DNA polymeraseはdUTPをUracil-N-glycosylase (UNG)と共に利用することによってキャリーオーバー・コンタミネーションを回避します。dTを含むDNAと同様にdUを含むDNAを多様な方法で解析することができます。このプロトコールを用いると、増幅されたDNAにはdUが含まれますがUNGを用いてPCRの前に分解しておくことが可能で、コンタミネーションを防止できます。PfuTurbo Cx hotstart DNA polymeraseはテンプレート内にdUTPが取り込まれていても6 kbまでのテンプレートを増幅することができます。

>>  Footnotes

  • 1. Fogg, et al. (2002), Nat Struct Biol. 9(12): 922-927
  • 2. Hogrefe, H., et al. (2002), Proc Natl. Acad. Sci. USA 99: 596-601

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PfuTurbo Cx Hotstart DNA Polymerase, 100 U 600410 100 U お問い合わせください Call
Specially formulated with a mutant of Pfu DNA polymerase designed to overcome uracil sensitivity for more robust performance
PfuTurbo Cx Hotstart DNA Polymerase, Reaction Buffer, DMSO
分析保証書 (C of A) 分析保証書 (C of A)　　マニュアル マニュアル
PfuTurbo Cx Hotstart DNA Polymerase, 500 U 600412 500 U お問い合わせください Call
Specially formulated with a mutant of Pfu DNA polymerase designed to overcome uracil sensitivity for more robust performance
PfuTurbo Cx Hotstart DNA Polymerase, Reaction Buffer, DMSO
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PfuTurbo Cx Hotstart DNA Polymerase, 1000 U 600414 1,000 U お問い合わせください Call
Specially formulated with a mutant of Pfu DNA polymerase designed to overcome uracil sensitivity for more robust performance
PfuTurbo Cx Hotstart DNA Polymerase, Reaction Buffer, DMSO
分析保証書 (C of A) 分析保証書 (C of A)　　マニュアル マニュアル