AffinityScript QPCR cDNA Synthesis Kit and QRT-PCR Master Mixes [RUO]

迅速かつ高効率でQRT-PCR用のcDNAを合成
高温を含む幅広い温度帯での逆転写が可能
簡潔なプロトコールなのでcDNA合成は15分で完了
マスターミックス仕様なのでコンタミやピペッティングによるエラーが最小限
3pgから3μgの範囲で高い再現性

掲載の製品はすべて試験研究用です。診断目的にご利用いただくことはできません。

幅広い温度帯で高い活性を維持し、QRT-PCRの感度が向上

AffinityScript QPCR cDNA Synthesis Kitは、幅広い反応温度帯で高い活性を持つAffinityScript Multi Temperature Reverse Transcriptase を用いたcDNA合成キットで、2-stepでの逆転写定量PCR（QRT-PCR）に最適化されています。本酵素では、MMLV由来の逆転写酵素に複数の変異を導入することで、37～55℃の間で高い活性を長時間維持することができ、高温での逆転写反応でも十分な量の cDNA合成が可能になっています。

このように本製品では、幅広い温度帯で高い収量が得られるため、ランダム・ヘキサマーによる室温での逆転写反応だけでなく、特異的なプライマーを用いた逆転写反応や、GCリッチや二次構造等の難しい配列からの逆転写で、高温での反応が必要な場合にも有効です。

また本製品では、様々なRNAのテンプレート量でも再現性が高く、高感度で対応できるようにバッファーが最適化されています。さらにcDNA合成を阻害する核酸分解酵素の混入を徹底的に排除し、酵素の精製度を高めています。このため本製品では、二次構造等を持つ難しいテンプレートからでも、これまでにない高い再現性と感度を兼ね備えた、2-stepでの逆転写定量PCR（QRT-PCR）を行うことができます（図1）。

図1　AffinityScript QPCR cDNA synthesis kitによる高感度での2-Step QRT-PCR

AffinityScript QPCR cDNA synthesis kit (濃緑色) では、 2-Step QRT-PCRにおいて、他社のcDNA 合成キットよりも高い感度が得られました(B 社：黄緑色、Q社：オレンジ色、I社：ピンク色). cDNA合成は各製品の推奨プロトコールに従い、アジレント(旧ストラタジーン)のBrilliant SYBR® Green QPCR Master mixを用いて増幅を行いました。

マスター・ミックス仕様なので実験が簡素化

AffinityScript QPCR cDNA Synthesis Kitでは、プロトコールが簡素化されているため全ての実験が25分で完了でき、従来の方法と比べて大幅な時間の削減が可能です。この他にも、合成時間が15分と短いにもかかわらず最大合成鎖長が12kbと長く、また、マスター・ミックス仕様なのでピペッティングのエラーによる反応間のCtのばらつきも最小限に抑えることができます（図2）。

図2　AffinityScript QPCR cDNA synthesis kitによる幅広い温度帯でのcDNA合成

異なるテンプレート量のTotal RNA（100ng、10ng、1ng) からOligo dTプライマーを用いて、3つの異なる反応温度 (42、50、55℃) でcDNA合成反応を行ったところ、どの反応温度でも同じCt値が得られました。

プライマーの選択

プライマーの選択は、cDNAの合成量、感度、GCリッチな塩基配列や転写産物の5’-や3’-末端近辺の塩基配列の検出等に大きな影響を及ぼします。AffinityScript QPCR cDNA Synthesis Kitには、マスター・ミックスとは別に、ランダム・プライマーとoligo-dT プライマーの両方が含まれているため、目的や標的の遺伝子に応じてこれらのプライマーを使い分けることができます。

豊富な製品構成

2-stepでのQRT-PCRは、同一のcDNAから複数の標的遺伝子の解析を行いたい場合や、cDNAを他の実験に用いたい場合、QPCR試薬を使い分けたい場合などに有効です。　AffinityScript QPCR cDNA Synthesis Kitは、Brilliant QPCR試薬のプローブ用（Brilliant II QRT-PCR, AffinityScript 2-Step Master Mix: #600827)、SYBR® Green用（Brilliant SYBR® Green QRT-PCR, AffinityScript Two-Step Master Mix: #600585）のいずれの試薬にも使えるよう、最適化されています。これらの製品は、RNAを精製することなく細胞から直接QRT-PCR を行えるSideStep II製品と組み合わせることができます。また、#600585はQRT-PCR抑制因子検出用のAlien QRT-PCR Inhibitor Alert（#300600）と組み合わせることもできます。

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AffinityScript One-Step RT-PCR Kit	600188	100 rxns	お問い合わせください	Call
AffinityScript One-Step RT-PCR Kit has been engineered to deliver the highest yield of any one-step RT-PCR kit.
Contains: 2X RT-PCR master mix containing AffinityScript RT/RNase Block and all components necessary to carry out both reverse transcription and PCR amplification of cDNA, ヘラクレス（Herculase） II and Pfu dUTPase/ArchaeaMaxx, and RNase free water.
分析保証書 (C of A)　　マニュアル

AffinityScript QPCR cDNA Synthesis Kit, 50rxn	600559	50 rxns	お問い合わせください	Call
Our AffinityScript QPCR cDNA synthesis kit delivers fast, efficient cDNA synthesis for QRT-PCR
AffinityScript Multiple Temperature Reverse Transcriptase/RNase Block Ribonuclease Inhibitor enzyme mix, 2X cDNA Synthesis Master Mix, oligo(dT) and random primers, Rnase-free water
分析保証書 (C of A)　　マニュアル

Brilliant II QRT-PCR, AffinityScript Two-Step Master Mix	600827	400 rxns	お問い合わせください	Call
High performance, ultra sensitive, next generation QRT-PCR 2-step master mix reagent with AffinityScript RT for reliable quantification across a wide range of targets and templates.
分析保証書 (C of A)　　マニュアル