Brilliant II QPCR and QRT-PCR Reagents

  • 高感度でより小さいCt値を実現
  • 再現性がさらに向上
  • さまざまなテンプレートに対応可能
  • より正確な定量実験結果を実現
  • アジレント(旧ストラタジーン)の Mx QPCR Systemsでの使用に最適
 
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Brilliant II QPCR と QRT-PCR 試薬

Brilliant II QPCR 、QRT-PCR試薬はこれまでにない高い感度と再現性を実現しました。QPCRにおける大きな課題のひと つは、低コピー数もしくは低濃度サンプルでの2倍差の検出です。Brilliant II QPCRは最少で2.5コピーのサンプルの2倍 差(1サイクルもしくは1Ct差)の検出が可能です(図1)。他社競合品と比較すると、高濃度や低濃度のテンプレートにおいてCtの立ち 上がりが早いだけではなく、あらゆる範囲のテンプレート濃度において反応効率が優れています(図2)。

図1 優れた感度・正確性により低濃度でも二倍差を検出

リニアライズしたプラスミドの2倍希釈列をテンプレートとしてQPCRを行いました。Brilliant II QPCR試薬により、1280コピーか ら2.5コピーまでの広い範囲で、2倍差が正確に検出されました。10段階の2倍希釈列において、Ctの差の平均値は1であり、スタンダー ドカーブから計算された増幅効率は95%でした。


図2 幅広い濃度帯における感度と再現性の比較

0.2 pgから200 ngのトータルRNAを用いてADP Ribosyl Factor II (ARF)遺伝子を増幅したところ、Brilliant II試薬は他社製品よ りも2-5 Ct早く立ち上がった。R2 = 0.988、増幅効率 = 100.2% 

 


早いCtでターゲットを検出することにより、従来よりも少ないサイクル数でも検出に十分な増幅が得られ、増幅産物のサイクル毎の複 製誤差を減らすことができます。これにより、再現性が改善され、より正確な定量結果を得ることができます。また、高い感度を実現 したことにより、テンプレート濃度のわずかな差を検出する際の再現性にも優れています(図3)。

図3 製品間での再現性の比較

20 pgのトータルRNAからARF遺伝子を8つのレプリケートで増幅したところ、Brilliant IIでは最大と最少のCtの違いが0.85であっ たのに対して、他社製品では1.2~3.2であった。

 


Brilliant II QRT-PCR 1-Step Master Mix Reagents

Brilliant II QRT-PCR (probe-based およびSYBR® Green) 1-Step試薬には、MMLV逆転写酵素を由来として、Brilliant IIでの1-Step QRT-PCRに最適化された逆転写酵素が配合されています。50℃での逆転写反応で最大の能力を発揮します。

Brilliant II QRT-PCR 2-Step Master Mix Reagents

The Brilliant II QRT-PCR (probe-based およびSYBR® Green) 2-Step試薬には、幅広い反応温度帯で高い活性を持つ AffinityScript Multiple Temperature Reverse Transcriptase (RT)が使われています。本酵素では、MMLV由来の逆転写酵素に複数 の変異を導入することで、37~55℃のあいだで高い活性を長時間維持することができ、高温での逆転写反応でも十分な量のcDNA合成が 可能になっています。このため本製品では、二次構造等を持つ難しいテンプレートからでも、これまでにない高い再現性と感度を兼ね 備えた、2-Stepでの逆転写定量PCR(QRT-PCR)を行うことができます。

Brilliant II 試薬とMx QPCR システムの組み合わせで最大のパフォーマンスを!

The Brilliant QPCR、QRT-PCR シリーズは、アジレント(旧ストラタジーン)のリアルタイム定量PCRシステム、Mx3000P と Mx3005Pを使って開発されました。Brilliant II試薬をMx 組みあわせてお使いいただくことで最大のパフォーマン スが得られます。

Mx3005P QPCR System
5色マルチプレッ クス機能、FRET機能を搭載したハイスペックかつフレキシビリティーに優れた、新世代リアルタイム定量PCRシステム

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Brilliant II QPCR Master Mix

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Brilliant II QPCR Master Mix, (10 pack)

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Brilliant II QRT-PCR Master Mix, 1-Step, 400rxn

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Brilliant II QRT-PCR Master Mix, 1-Step, 4,000rxn

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Brilliant II QRT-PCR, AffinityScript Two-Step Master Mix

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Brilliant II QRT-PCR Core Reagent Kit, 1-Step, 400rxn

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