InterPlay Adenoviral TAP System

  • 幅広い哺乳類細胞より相互作用タンパク質を高純度で精製
  • アデノウイルス遺伝子導入システムによりタンパク質の高い収量を実現
  • 組換えアデノウイルスは分裂・非分裂細胞のいずれにも感染可能
  • Tandem affinity purification により高純度のタンパク質複合体を精製
 
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相互作用タンパク質の精製

アジレント(旧ストラタジーン)の InterPlay Adenoviral TAP Systemはアジレント(旧ストラタジーン)独自のtandem affinity purification (TAP) システムとアデノウイルス遺伝子導入システムであるAdEasy™ XL Adenoviral Vector Systemを組み合わせたシステムです。このシステムは幅広い哺乳類細胞への高い遺伝子導入効率とタンパク質の高い収量を実現し、高純度の相互作用タンパク質の精製および次の解析への利用を可能にしました。

Tandem Affinity Purification (TAP) システムによる精製

InterPlay Mammalian TAP SystemおよびInterPlay Adenoviral TAP Systemは哺乳類細胞から対象のタンパク質(ベイト)と相互作用するタンパク質の回収を可能にします。この斬新な精製方法は、まず2つのアフィニティー・タグ(ストレプトアビジン結合ペプチド(SBP)とカルモジュリン結合ペプチド(CBP))と融合したベイトを哺乳類細胞で発現させます。次に行うストレプトアビジン・レジンとカルモジュリン・レジンによる二段階の精製には穏やかな洗浄と溶出を用いるので、タンパク質の相互作用に対する影響は最小限に抑えられます。また、SBPとCBPはアフィニティー・レジンから容易に溶出されるため、タンパク質分解酵素を用いて溶出する必要がなく、相互作用タンパク質を高純度で精製することが可能です。

InterPlay Adenoviral pNTAP Systemを用いてSBPとCBPタグ付きCDK2をAD-293細胞で発現させました。ストレプトアビジンとカルモジュリンにより精製された細胞可溶化液を抗CDK2、 抗cyclin E、抗カルモジュリン結合ペプチド抗体を用いてウエスタン・ブロットで解析した結果、精製によりcyclin Eが濃縮されたことが示されました。

アデノウイルスによる遺伝子導入

InterPlay Adenoviral TAP SystemsはInterPlay Mammalian TAP SystemsのTAPタグとアデノウイルス遺伝子導入システムであるAdEasy XL Adenoviral Vector Systemを組み合わせたシステムです。アデノウイルス・ベクターは一般的なトランスフェクション法と比べ、分裂・非分裂細胞に関係なく、幅広い哺乳類細胞に目的遺伝子を導入することができます。組換えアデノウイルスは高い力価(トランスフェクション後10^7~10^8 pfu/ml )をもたらすことから、タンパク質の高い収量を実現します。AdEasy XL vector systemにはヒト・アデノウイルス、ヒト由来の細胞株を使用するため、ヒト由来のタンパク質を大量に発現することができ、正確な翻訳後修飾や折りたたみ構造を再現します。AdEasy XL vector systemでは pTAP shuttle vectorに最大6.6kbのDNAを組み込むことができ、アデノウイルスはepichromosomalに留まることから、ホスト細胞の遺伝子を活性化あるは不活性化することはほとんどありません。

InterPlay Adenoviral pNTAP Systemを用いてSBPとCBPタグ付きCDK2、chloramphenicol acetyltransferase (CAT)、beta-galactosidaseを HeLa細胞で発現させました。ストレプトアビジンとカルモジュリンにより精製された細胞可溶化液を抗cyclin B1抗体を用いウエスタン・ブロットで解析した結果、HeLa細胞でcyclin B1とCDK2が相互作用することが示されました。

>>  Footnotes

  • 1. Wilson, D. S., Keefe, A.D., Szostak, J.W. (2001), Proc Natl Acad Sci 98 3750-3755
  • 2. Keefe, A.D., Wilson, D.S., Seelig, B., and Szostak, J.W.  (2001), Protein Expr Purif 23 440-446
  • 3. Stofko-Hahn, R.E., Carr, D.W., and Scott, J.D (1992), FEBS Letters 302(3) 274-278
  • 4. Carr, D.W., Stofko-Hahn, R.E. Fraser, I.D., Bishop, S.M., Acott, T.S (1991), J Biol Chem 266(22): 14188-14192

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InterPlay Adenoviral N-terminal TAP System

240213 1 kit お問い合わせください Call
Vectors, cells, resins, and buffers for adenoviral gene delivery and tandem affinity purification of interacting proteins.
N-terminal adenoviral shuttle vectors; pNTAP Shuttle vectors (A, B, and C) in all three reading frames, MS-Grade Calmodulin Resin, Streptavidin Resin, and lysis, binding, and elution buffers
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InterPlay Adenoviral N-terminal TAP Vectors

240214 4 x 20 µg お問い合わせください Call
Vectors for adenoviral gene delivery and tandem affinity purification of interacting proteins.
N-terminal adenoviral shuttle vectors; pNTAP Shuttle vectors (A, B, and C) in all three reading frames
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InterPlay Adenoviral C-terminal TAP System

240215 1 kit お問い合わせください Call
Vectors, cells, resins, and buffers for adenoviral gene delivery and tandem affinity purification of interacting proteins.
C-terminal adenoviral shuttle vectors; pCTAP Shuttle vectors (A, B, and C), MS-Grade Calmodulin Resin, Streptavidin Resin, and lysis, binding, and elution buffers
マニュアル マニュアル

InterPlay Adenoviral C-terminal TAP Vectors

240216 4 x 20 µg お問い合わせください Call
Vectors for adenoviral gene delivery and tandem affinity purification of interacting proteins.
C-terminal adenoviral shuttle vectors; pCTAP Shuttle vectors (A, B, and C),
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InterPlay Mammalian TAP Purfication Kit

240107 1 kit お問い合わせください Call
Resins and buffers required to perform tandem affinity purification.
MS Grade Calmodulin Resin, Streptavidin Resin, and lysis, binding, and elution buffers.
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InterPlay TAP Purification Buffer Kit

240099 1 kit お問い合わせください Call
Buffers required to perform tandem affinity purification.
Lysis, binding, and elution buffers.
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Streptavidin Resin

240105 1.25 ml お問い合わせください Call
Streptavidin Resin
1.25 ml of streptavidin resin
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