SideStep Lysis and Stabilization Products

SideStep Lysis and Stabilization Buffer

  • RNAのロスを最小限に抑え、正確な遺伝子発現解析;精製されたRNAを用いた場合と同等の解析結果
  • サンプルは10分で定量RT-PCRに使用可能
  • RNAは最大で6ヶ月間保存可能
  • 幅広いサンプル細胞数に対応
 
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特徴

  • RNA精製無しで細胞内の遺伝子発現を定量
  • 細胞を即可溶化し、核酸を6ヶ月間まで安定に保存
  • 1-チューブ仕様で細胞にバッファーを加えVortexするだけ
  • 競合他社のキットより簡単
  • 最小1個、最大100万個(10^6)個の細胞からCell Lysateを作成
  • 10分で細胞を可溶化しRNAを安定化
  • 定量PCRに直接使用可能なRNA、mRNA、cDNA、DNAを細胞より溶出
SideStep Lysis and Stabilization Bufferを使用すればRNAやDNA精製ステップ無しで、細胞から直接リアルタイムQPCRによる解析を行えることから、核酸分子の分解やロスを最小限に抑え正確な遺伝子発現データを得ることが可能です。よって、複数のサンプルを扱う時にRNA回収量の誤差を最小限に抑えるのに最適でQPCRデータの信頼性を向上します。アジレント(旧ストラタジーン)のSideStepバッファーはシンプルで簡単に扱うことができ、幅広いサンプル量に対応し、ハイ・スループット用途に使用可能です。SideStepバッファーはmRNA濃縮キット、cDNA合成キット、SYBR® Green、プローブ・ ベースのQRT-PCRキットを含むキットとしても提供しています。

用途

  • siRNAによるノックダウン実験の遺伝子発現解析
  • SYBR® Green およびプローブ・ベースのリアルタイムQRT-PCR解析
  • miRNAの検出
  • 少量の転写産物の検出
  • 細胞や組織からのmRNA濃縮
  • 組織、生体組織小断片のlaser micro-dissection サンプルの遺伝子発現解析
  • 高品質のQPCRグレードのcDNAを直接細胞より合成

サンプルのロスを最小限に抑え正確な遺伝子発現解析

ほとんどの精製プロトコールはカラムを用い、複数のステップとサンプルをチューブからチューブへと移す作業が必要です。その結果、いずれかのステップでRNAやDNAがロスする可能性を含み、下流の定量解析に影響を及ぼす可能性があります。これはサンプルが少数の細胞や限られた細胞数である場合は重大な問題となります。その上、多数の細胞を使用する場合でも、転写量の低いメッセージが精製過程で失われる可能性があります。SideStepバッファーは1-チューブで、カラムではなく溶液のみ使用するシステムです。特許出願中のアジレント(旧ストラタジーン)の溶液は細胞を可溶化し溶液中にRNAおよびDNA分子を溶出し、更にこれらの核酸分子を追加作業無しで即座に安定化します。SideStepバッファーを使用する手法はサンプルのロスと分解を防ぎ、QRT-PCRによる正確な遺伝子発現の定量を行うことを可能としますので、非常に貴重なlaser micro-dissection 細胞などの、核酸サンプルとしての保存に最適です。(図1)

図1:SideStepLysateと精製されたRNAは同等の結果を示しました 反応効率 92.5%、Rsq=1.00

最大6ヶ月までRNAを保存可能

SideStepバッファーはRNAやDNAを細胞から溶出すると即座に安定化するというのユニークな特性を持っています。それに対して、競合他社の同様の製品はサンプルを単に可溶化するだけです。RNAはSideStepバッファー中で安定化されるため、サンプルを即座に解析することも可能ですが、全てのサンプルが収集されるまで-20℃で保存することも可能です。この特性は膨大な数のサンプルをスクリーニングするときに理想的です。サンプルはデータが収集されるまで保存可能で、その後さらに解析することも可能です。SideStepバッファーにより作成されたCell lysateを6ヶ月間保存した後にAgilent  Bioanalyzerにより解析した結果、RNAの分解は認められませんでした。また、Cell lysateをQRT-PCRにより解析したところ、精製されたRNAと比較しCt値のシフトは認められず、これはRNAがSideStepバッファー中に保存されている間、安定で分解されない事を示唆しています。(図2)

図2:SideStepCell Lysateは最大6ヵ月まで安定 6ヵ月保存されたSideStepLysate中のトータルRNAを Agilent bioanalyzerにより解析しました(2A)。シャープな28Sと18SリボゾームRNAのピークとRNA Integrity Number 8.5はRNAが完全で分解されていないことを示唆しています。SideStepバッファー中に6ヵ月間-20℃で保存されたRNAと(青)-80℃で保存された精製されたRNA(赤)のmRNAを Brilliant SideStep QRT-PCRマスターミックスとGAPDH・プローブで解析しました。その結果、RNAはSideStepバッファー中で安定で、Ct値のシフトは認められない事を示しました。反応効率 91%、Rsq=0.999

実験を合理化

一般的に核酸の精製作業は困難ではありませんが、時間が掛かり、単調で非効率的な事もあります。SideStepは核酸サンプルを作成する手間を最小限に抑えます。室温での10分間の細胞可溶化で、すぐにQPCRにより解析することができます。SideStepを使用する事により、精製作業無しで細胞から直接QPCRを行う事が可能となり、余った時間を他の実験や解析に費やすことができます。

幅広いサンプル細胞数に対応

SideStepは幅広いサンプル細胞数に対応します。他のキットはこのような幅広いサンプル細胞数に対応せず、これほど簡単に使用することはできません。SideStepのプロトコールは1反応あたり最大で100万(10^6)個の細胞に使用できるよう最適化されており、細胞数の調整操作などに費やす時間を最小限に抑えます。さらに、使用するSideStepバッファー量は細胞数により調整することができます。

僅か25分で細胞からcDNAを合成

SideStepシリーズの1つ、SideStep QPCR cDNA Synthesis kitは完全長のQPCRグレードcDNAを高収量で合成するキットです。SideStep Lysis and Stabilization BufferとStrataScript QPCR cDNA Synthesis kitを組み合わせることで細胞から直接cDNAを25分で合成します。本キットはSYBR® Greenおよびプローブ・ベースの2-ステップQRT-PCRに使用できるように最適化されています。

細胞からのQRT-PCRが簡単

SideStep cell lysatesから直接RNAの定量を行う事ができるキットを提供しています。Brilliant SYBR® SideStep QRT-PCR Master Mix, 2-Stepは細胞の可溶化、RNAの安定化、cDNA合成、SYBR® GreenによるQPCR解析に必要な試薬を全て含んでいます。また、Brilliant SideStep QRT-PCR Master Mix, 1-stepをプローブ・ベースによるRNA定量用に提供しています。

研究目的に合わせ多種のSideStep シリーズを提供

SideStepシリーズは実験の目的に合わせ多種のキットを提供しています。SideStepバッファーは2つのサイズ(5mlと10ml)を提供しています。SideStep mRNA Enrichment Kit を使用すれば、トータルRNAの精製無しで、簡単な30分のプロトコールで細胞から直接mRNAを精製、濃縮することができます。

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This product is an Authorized 5’ Nuclease Core Kit. Use of this product is covered by one or more of the following US patents and corresponding patent claims outside the US:  5,079,352, 5,789,224, 5,618,711, 6,127,155, 5,677,152 (Claims 1-23 only), 5,773,258 (claims 1 and 6 only), 5,407,800, 5,322,770, 5,310,652, 5,210,015, 5,487,972, and claims outside the US corresponding to US Patent No. 4,889,818. The purchase of this product includes a limited, non-transferable immunity from suit under the foregoing patent claims for using only this amount of product for the purchaser’s own internal research. Separate purchase of a Licensed Probe would convey rights under the applicable claims of US Patents Nos. 5,538,848, 5,723,591, 5,876,930, 6,030,787, 6,258,569, 5,804,375 (claims 1-12 only), and 6,214,979, and corresponding claims outside the United States. No right under any other patent claim and no right to perform commercial services of any kind, including without limitation reporting the results of purchaser's activities for a fee or other commercial consideration, is conveyed expressly, by implication, or by estoppel. This product is for research use only. Diagnostic uses under Roche patents require a separate license from Roche. Further information on purchasing licenses may be obtained from the Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA.

Patent pending

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SideStep Lysis and Stabilization Buffer, 10 ml

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Cell lysis and immediate stabilization of RNA and DNA for real time PCR analysis.
10 ml
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