Pfu DNA Polymerases

Pfu DNAポリメラーゼ

  • ハイフィデリティ増幅に理想的
  • 3'-5' エキソヌクレアーゼ活性が低いエラー率を提供
  • 現在可能な最も熱安定性の高いDNAポリメラーゼ
  • 拡張酵素の欠如により、不要な 3' オーバーハングは無し
  • 平滑末端PCRクローニングに最適
  • 最適温度は 75 ℃ くらい
  • 98 ℃ で1時間インキュベーションしても 95% 以上の活性をキープ

PCR カタログ (英語、5991-9020EN)

 
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ネイティブと組み換え体 Pfu DNAポリメラーゼ

用途

  • ハイフィデリティPCRとプライマー拡張反応
  • PCRクローニングと平滑末端増幅産物の産生

ハイフィデリティ熱安定性酵素

超好熱性の古細菌、Pyrococcus furiosus、に由来する Pfu DNAポリメラーゼは他の熱安定性ポリメラーゼと比べて、優れた熱安定性とプルーフリーディング性質を備えていることが示されてきました。1-6 Taq DNAポリメラーゼとは違い、非常に熱安定性である Pfu DNAポリメラーゼはポリメラーゼがヌクレオチド‐誤取り込みエラーを修正できる 3' から 5' へのエキソヌクレアーゼプルーフリーディング活性を持っています。これは、Pfu DNA ポリメラーゼによって産生されたPCRフラグメントは Taq によって産生されたPCRインサートよりも少ないエラーを持つことを意味しています。PCR反応で Pfu DNAポリメラーゼを使用することにより、PCR-Script ベクターのような平滑末端ベクターへのクローニングに理想的な平滑末端のPCR産物となります。Pfu DNA ポリメラーゼはハイフィデリティDNA合成を必要とする技術において優れています。

製品規格

  • 単位規格:1ユニットは 72 ℃ で 10 nm のトータルdNTP を30分で組み入れます
  • 濃度:2,500 ユニット/ml
  • 純度:PCR用途のために広範に検査されました

反応条件

  • 本来の Pfu ポリメラーゼ:1X ネイティブ Pfu バッファー§、200 µM のそれぞれの dNTP、0.1~0.5 µM のそれぞれのプライマー、2.5 ユニットのネイティブ酵素、1~100 ng プラスミド鋳型DNA、もしくは 100~250 ng ゲノム鋳型DNA
  • クローン Pfu ポリメラーゼ:1X クローン Pfu バッファー§、200 µM のそれぞれの dNTP、0.1~0.5 µM のそれぞれのプライマー、2.5 ユニットのクローン酵素、1~100 ng プラスミド鋳型DNA、もしくは 100~250 ng ゲノム鋳型DNA
  • 保存用バッファー:50 mM Tris-Cl (pH 8.2)、0.1 mM EDTA、1mM DTT、0.1% Igepal、0.1% Tween 20、50% グリセロール
  • 保証できる安定性:‐20℃で6ヶ月

§cDNAの増幅ではMg2+の終濃度を2 mM から 3 mMへ上げる必要があるかもしれません。

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Accuracy of Thermostable DNA Polymerases: PfuTurbo and Pfu DNA polymerases are the most accurate thermostable enzymes during DNA synthesis. Accuracy is defined as the average number of correct nucleotides a given polymerase incorporates before making an error. Enzyme accuracy is represented as error rate^-1 where error rate = mutation frequency per bp per duplication.

>>  Footnotes

  • 1. Cline, J., Braman, J.C., and Hogrefe, H.H. (1996), Nucleic Acids Res. 24: 3546-3551.
  • 2. Lundberg, K.S., et al. (1991), Gene. 108: 1-6.
  • 3. Scott, B., Nielson, K., Cline, J., and Kretz, K. (1994), Strategies. 7: 62-63.
  • 4. Bergseid, M., et al.  (1991), Strategies. 7: 62-63.
  • 5. Cline, J., et al. (1992), Strategies. 5: 50.
  • 6. Flaman, J.-M., et al. (1994), Nucleic Acids Res. 22: 3259-3260.

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>>  Licensing

U.S. Patent Nos. 6,734,293, 6,444,428, 6,183,997, 5,948,663, 5,545,552

Native Pfu:

Limited Label License: Purchase of this product conveys to the purchaser only the non-transferable right under these patents to use the product for research use only by the purchaser. No rights are granted to the purchaser hereunder to sell, modify for resale or otherwise transfer this product, either alone or as a component of another product, to any third party. Agilent reserves all other rights, and this product may not be used in any manner other than as provided herein. For information on obtaining a license to use this product for purposes other than research, please contact Agilent, Business Development, 11011 North Torrey Pines Road, La Jolla, California 92037. Phone (858) 373-6300.

U.S. Patent Nos. 7,045,328; 6,489,150; 5,948,663; 5,866,395; and 5,545,552 and patents pending
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Product Catalog # Amount Price

Pfu DNA Polymerase (native), 100 U

600135 100 U お問い合わせください Call
Native version. The highest fidelity enzyme for PCR and primer-extension reactions, PCR cloning and generating blunt-end amplification product.
Native Pfu DNA polymerase, 10X Native Plus buffer
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Pfu DNA Polymerase (native), 500 U

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Native version. The highest fidelity enzyme for PCR and primer-extension reactions, PCR cloning and generating blunt-end amplification product.
Native Pfu DNA polymerase, 10X Native Plus buffer
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Pfu DNA Polymerase (native), 1000 U

600140 1,000 U お問い合わせください Call
Native version. The highest fidelity enzyme for PCR and primer-extension reactions, PCR cloning and generating blunt-end amplification product.
Native Pfu DNA polymerase, 10X Native Plus buffer
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Cloned Pfu DNA Polymerase, 100 U

600153 100 U お問い合わせください Call
Recombinant version, For high-fidelity PCR and primer-extension reactions, For PCR cloning and generating blunt-end amplification product.
Cloned Pfu DNA polymerase, 10X Cloned Pfu buffer
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Cloned Pfu DNA Polymerase AD, 100 U

600353 100 U お問い合わせください Call
Recombinant version containing a reformulated buffer system for increased economy with the same performance and fidelity as our original Cloned Pfu DNA Polymerase, for high-fidelity PCR and primer-extension reactions, PCR cloning, and generating blunt-end amplification product
Cloned Pfu DNA polymerase AD, 10X Cloned Pfu AD buffer
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Cloned Pfu DNA Polymerase, 500 U

600154 500 U お問い合わせください Call
Recombinant version, For high-fidelity PCR and primer-extension reactions, For PCR cloning and generating blunt-end amplification product
Cloned Pfu DNA polymerase, 10X Cloned Pfu buffer
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Cloned Pfu DNA Polymerase AD, 500 U

600355 500 U お問い合わせください Call
Recombinant version containing a reformulated buffer system for increased economy with the same performance and fidelity as our original Cloned Pfu DNA Polymerase, for high-fidelity PCR and primer-extension reactions, PCR cloning, and generating blunt-end amplification product
Cloned Pfu DNA polymerase AD, 10X Cloned Pfu AD buffer
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Cloned Pfu DNA Polymerase, 1000 U

600159 1,000 U お問い合わせください Call
Recombinant version, For high-fidelity PCR and primer-extension reactions, For PCR cloning and generating blunt-end amplification product
Cloned Pfu DNA polymerase, 10X Cloned Pfu buffer
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Cloned Pfu DNA Polymerase AD, 1,000 U

600357 1,000 U お問い合わせください Call
Recombinant version containing a reformulated buffer system for increased economy with the same performance and fidelity as our original Cloned Pfu DNA Polymerase, for high-fidelity PCR and primer-extension reactions, PCR cloning, and generating blunt-end amplification product
Cloned Pfu DNA polymerase AD, 10X Cloned Pfu AD buffer
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Cloned Pfu DNA Polymerase, 5000 U

600160 5,000 U お問い合わせください Call
Recombinant version, For high-fidelity PCR and primer-extension reactions, For PCR cloning and generating blunt-end amplification product
Cloned Pfu DNA polymerase, 10X Cloned Pfu buffer
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