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多くの課題を抱えながらも、Jiang Zhi-Hong 氏のチームは、アジレントの最先端の機器と優れた分析ソフトウェアを使用して、それらを克服してきました。
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細胞内の生理活性スフィンゴ脂質は微量ですが、種類は多様です。
「スフィンゴ脂質には、さまざまな異性体と相同体があります。異性体を分離できなければスフィンゴ脂質を定量化できず、その構造を特定することもできません」
このため、Jiang 氏と共同研究者は、確度を向上させる方法および「生物学的に重要であるのに微量しか存在せず、極めて多様なスフィンゴ脂質の構造を明確に特定する」方法を探し始めました。
最終的に見つけ出したソリューションは、超高性能なクロマトグラフィー分離と四重極飛行時間型およびトリプル四重極質量分析法との組み合わせでした。
Jiang Zhi-Hong 氏と共同研究者は大きな影響力を持つ論文誌「Analytical Chemistry」に次のように書いています。
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「我々の方法を使うと、潜在的に重要でありながら微量の SPL の複数のグループを簡単かつ明確に特定することができます。通常これらの SPL は同位体/異性体的な種によって覆われているため、大部分は見落とされています」
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実際に、アジレントの専門家の協力のもとに、サンプル前処理法を改善し、質量分析法パラメータを最適化した、極めて効率の良い手法が生み出されました。
その結果、86 種類の個別のスフィンゴ脂質が 1 回の実行で測定できました。この数は PC12 細胞で特定された数として最多です。
「アジレントの液体クロマトグラフィー／質量分析の機器とソフトウェアは極めて有益で、アジレントの MassHunter ソフトウェアはスフィンゴ脂質のデータベースを確立するうえで非常に役立ちました。このソフトウェアの定性分析機能により、スフィンゴ脂質を迅速かつ正確に同定することもできました」と Jiang Zhi-Hong 氏は話します。
「この強力なソフトウェアと分析器の優れた検出性能によって、微量のスフィンゴ脂質を正確に検出し、同定し定量化するという目標を達成できました」
これまでに検出されなかった種類のスフィンゴ脂質も検出することができました。
Jiang 氏のチームは、「Analytical Chemistry」に掲載された論文で、この改善された検証済みの手法によって研究者は信頼性の高いデータを得ることができ、これが重要なバイオマーカーの発見につながることになると指摘したうえで、次のように述べています。
「向上したリピドミクス測定法は、信頼性の高い診断を確実にするための標準臨床ツールとなっていくことでしょう」
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