Vitality hrGFP Mammalian Expression Vectors [RUO]

Vitality hrGFP 哺乳類発現ベクター

  • 容易に検出できる高レベルの緑色蛍光
  • 遺伝子の発現を妨げない低毒性レポーター
  • stable cell line の産生に hrGFP の使用を可能にする安定した発現
  • FACSや蛍光顕微鏡を使用しての in vivo での非侵襲性の検出

掲載の製品はすべて試験研究用です。診断目的にご利用いただくことはできません。

関連情報リンク

新しい生物由来の蛍光タンパク質で、新しいパフォーマンス！

健康な細胞で遺伝子発現の研究を

red-shifted、ヒト化 Aequorea タンパク質(EGFP)の利用者からの共通の不満は EGFP の高毒性によって発現が不安定になってしまうことです。この毒性は stable および transientな発現の 実験のいずれにおいても、広範囲な遺伝子の発現を変化させてしまうことにより細胞に影響を及ぼします。アジレント(旧ストラタジーン)では、緑色蛍光タンパク質ををまったく異なる生物からクローニングし、配列をヒト化することによってこの問題を解決しました。毒性が低いので、実験に望ましくないアーチファクトをもたらすこと無く、遺伝子発現を解析可能になります。

パフォーマンスの劇的な向上

Vitality hrGFP は毒性が少なく、EGFP のように細胞の本来の遺伝子発現を乱すことがありません。 hrGFP もしくは EGFP を発現している HeLa 細胞の遺伝子発現特性を比較するためにマイクロアレイ解析と蛍光顕微鏡を使用した際に、大幅なパフォーマンスの差が明らかになりました。マイクロアレイの結果(図1)はわずか1日のあいだEGFPを発現させた細胞に起こった遺伝子発現の変化を示しています。これらの変化は3日後でも蛍光顕微鏡によって観察され得る、細胞の外観には影響を及ぼしません(図2)。10,800 spot のマイクロアレイを用いた解析では、EGFP を発現している細胞では3000以上もの遺伝子で遺伝子発現レベルが劇的に変化したことが明らかになりました。hrGFP を発現している細胞では、数百の遺伝子で発現レベルの変化がみられました。それぞれの集団は発現レベルの変化を2つの GFPs 間で比較するために、同等の感染効率(MOI)で形質導入されました。これらの実験から、 Vitality hrGFP の発現はホストの遺伝子発現特性にわずかな影響しか与えず、ホスト細胞の安定性・状態を保つということを示しています。別の実験では(図3&4)、蛍光顕微鏡での観察結果から、 EGFP を発現している細胞は形質導入後すぐ顕著に健全な状態ではなくなり、時間の経過と共に、細胞が死ぬかEGFPの発現がなくなることが明らかになりました。逆に、hrGFP を発現している細胞は良い状態を保ち、発現を失なわずに長期間にわたって強い蛍光が観察されました。

万能な発現ベクター

Vitality hrGFP 哺乳類発現ベクターはさまざまな遺伝子発現研究にふさわしいものを選択できるように、多様なベクター フォーマットで提供しています。全ての Vitality hrGFP ベクターはインサート無しに蛍光発色します。これにより、クローニングの前に hrGFP ベクターを使用する細胞にトランスフェクションし、hrGFP発現を確認することが可能です。

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Making Stable Cell Lines Each Vitality vector contains a LoxP site so you can easily insert different drug resistance genes using site-specific recombination. The recombination reaction is illustrated here. Prefabricated drug resistance modules are available with your choice of either Puromycin, Hygromycin or Neomycin markers.
Diagram 1A: Microarray Data
Diagram 1B: Microarray Data
Diagram 2: Fluorescence Microscopy Analysis in Microarray Experiment
Diagram 3: Fluorescence Activated Cell Sorting Analysis (FACS)
Diagram 4: Viability of Cells Expressing hrGFP vs. EGFP in Transducted Hela Cells Comparison of the relative viability of cells for high-level expression of each GFP over time and passage number. HeLa cells were transduced with retroviral vectors harboring either the hrGFP gene, or that for the red-shifted, humanized Aequorea protein (EGFP). Cells were transducted at an equivalent multiciplity of infection with one or the other virus, and then passaged for several weeks in the absence of any selection. At various times following transduction, the cell populations were photographed using a fluorescent microscope.

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>>  Licensing

U.S. Patent No.7,083,931 and patent pending

Patents pending. Certain hrGFP products, and other products containing hrGFP variants, require a license from Agilent. For license information, please contact Business Development, 858-373-6300 (phone) or 858-373-5300 (fax).

CMV promoter:
Use of the CMV promoter is covered under U.S. Patent Nos. 5,168,062 and 5,385,839 owned by the University of Iowa Research Foundation and licensed FOR RESEARCH USE ONLY.

FLAG® Epitope-tag:
Manufactured under license from Sigma-Aldrich Co. under U.S. Patent Nos. 4,703,004, 4,782,137 and 4,851, 341. Other patents pending.

Anti-FLAG® antibody:
Purchased from Sigma for resale under license from Sigma-Aldrich Co. under U.S. Patent Nos. 4,703,004, 4,782,137 and 4,851,341. Other patents pending. 

FLAG® and Anti-FLAG® are registered trademarks s of Sigma-Aldrich Co. M1, M2, and M5 are trademarks of Sigma-Aldrich Co. Use of this product is solely for investigational, experimental or research purposes. Not for commercial, diagnostic or therapeutic uses.

BGH polyA sequence:
The bovine growth hormone (BGH) polyadenylation sequence is licensed under U. S. Patent No. 5,122,458 for research purposes only. “Research purposes” means uses directed to the identification of useful recombinant proteins and the investigation of the recombinant expression of proteins, which uses shall in no event include any of the following:
a. Any use in humans of a CLAIMED DNA or a CLAIMED CELL;
b. Any use in human of protein or other substance expressed or made at any stage of its production with the use of a CLAIMED DNA or a CLAIMED CELL;
c. Any use in which a CLAIMED DNA or CLAIMED CELL would be sold or transferred to another party other than Agilent, its affiliate, or its sublicensee;
d. Any use in connection with the expression or production of a product intended for sale or commercial use; or
e. Any use for drug screening or drug development.

The term “CLAIMED DNA” means a DNA construct that contains the bgh polyadenylation signal and “CLAIMED CELL” means any eukaryotic cell or cell line that contains the bgh polyadenylation signal. Any use of the bgh polyadenylation signal that satisfies any one of parts (a) through (e) of the above definition requires a nonexclusive license from RCT. Inquires for licensing should be direct to Jennifer Tonzello Caldwell, Ph.D., Research Corporatio Technologies, Tel: (520) 748-4400, Fax: (520) 748-0025."

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