QuikChange XL Site-Directed Mutagenesis Kit [RUO]

QuikChange XL 部位特異的変異導入キット

8 kb 以上の大きくて難しいプラスミドに最適化
伸長時の二次的なエラーを抑制する mutagenesis grade PfuTurbo DNAポリメラーゼ
キット方式で部位特異的な変異導入を3時間の操作と一晩の形質転換で作製可能
Non-PCR複製方式で 80% 以上の効率と最小限のバックグラウンドを実現
DNAテンプレートの一本鎖化、サブクローニング、特異的制限酵素部位、形質転換の繰り返し作業、in vitro でのベクターのメチル化前処理等は不要です
QuikChange Primer Design Program
DpnI 処理が5分の高速プロトコル採用の最新バージョンはこちらQuikChange Lightning Site-Directed Mutagenesis Kit

掲載の製品はすべて試験研究用です。診断目的にご利用いただくことはできません。

関連情報リンク

用途

長い(8 kb 以上)、あるいは難しい配列への変異導入
点変異の導入
ひとつ、あるいは複数のアミノ酸の除去及び挿入
ドメイン交換法にも利用可能

80% 以上の導入効率を持つNon-PCR変異導入法

QuickChange XL 部位特異的突然変異導入キット*はこれまでの部位特異的突然変異導入技術と比べて簡単・迅速で効率のよい、non-PCR方式による変異導入キットです。QuickChange XL キットは、DNA一本鎖化や面倒な作業、難しい操作の必要がない便利なキットです。塩化セシウムあるいはミニプレップ法で精製されたテンプレートDNA（StrataPrep プラスミドミニプレップ精製キットで精製されたプラスミドDNAなど）に変異を導入し、形質転換させることで、80～100% のコロニーに目的の変異を導入することができます。

PCR‐ベースの点変異導入より高い正確度

QuikChange XL キットでは、正確性の高いPfuTurbo DNAポリメラーゼ^**を採用していることと、非PCRを基本とした遺伝子増幅方法を採用していることにより、変異導入部位以外での望まない変異の発生がほとんどありません。

大きなベクター、そして難しい配列への変異導入

QuikChange XL キットは XL10-Gold ウルトラコンピテントセル^*、QuikSolution 試薬、そして特別に最適化されたプロトコールにより大きなプラスミドへの変異導入を成功に導きます。XL10-Gold 細胞はサイズの大きいDNAや、ライゲーション反応後のDNA分子の形質転換効率を向上させる Hte 表現型を持っています。また、QuikChange 反応に QuikSolution 試薬を添加することにより、大きなプラスミドの複製が促進されます。

シンプルなnon-PCR複製法

QuikChange 部位特異的点変異導入法では、ミニプレップで精製されたプラスミド DNAもしくは塩化セシウム精製されたDNAが使用できます。基本的な手順は、変異を入れたい配列を持つ二本鎖DNAプラスミドと目的の変異を含む2つの合成オリゴヌクレオチドプライマーを混ぜ合わせるところから始まります。ベクターのそれぞれのストランドに相補的なオリゴヌクレオチドプライマーが結合し、そこからPfuTurbo DNAポリメラーゼによって伸張されます。その結果、目的の変異を持ち、ニックを含む変異導入プラスミドができあがります。サーマルサイクリングの後、反応液をDpnⅠで処理することでメチル化されている元のテンプレートDNAを消化し、突然変異を含む新しく合成されたDNAを選択的に残します。ほとんどの E. coli 菌株から単離されたDNAはdam-メチル化されているため、メチル化または半メチル化されているDNAに特異的な Dpn I 消化を受けることになります。新たに合成され、ニックが入った円状のDNA鎖はXL10-Gold ウルトラコンピテントセルに形質転換され、大腸菌のもつリガーゼによってニックが修復されます。以上の方法により、80% 以上のコロニーで目的の変異を望むプラスミドが得られます。QuikChange キットでは、微量のDNAテンプレートで部位特異的変異導入を行うことが可能です。PfuTurbo DNAポリメラーゼの高いフィデリティ、少ないサイクル数で最適化されたプロトコール、形質転換効率の高いXL10-Gold ウルトラコンピテントセルが本キットの高い変異導入効率、低いランダム変異誘発を支えています。

New! Mutagenesis製品のアプリケーション・ブックレット

アジレント(旧ストラタジーン)のQuikChangeシリーズをはじめとしたMutagenesis関連製品の各種アプリケーションがScience誌に掲載されました。下記リンク先よりブックレットをPDFファイルでダウンロード可能です！

Science Mutagenesis Techniques Collections

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The QuickChange II 1-Day Site-Directed Mutagenesis Method: 1. Mutant strand synthesis. 2. Dpn I Digestion of parental DNA template. 3. Transformation of the resulting double-stranded nicked DNA molecules. After transformation, the XL10 Gold E. coli cell repairs nicks in the plasmid.

>> Footnotes

1. Burke T.F. (1998), Oncogene 16 1031-1040
2. Kunkel, T.A. (1985), Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 82 488
3. Vandeyar, M,m et al. (1988), Gene 65 129-133
4. Sugimoto, M., et al. (1989), Anal. Biochem. 179 309-311
5. Taylor, J. W. and Eckstein, F. (1985), Nucleic Acids Res. 13 8764
6. Papworth, C., Braman, J., and Wright, D. A. (1996), Strategies 9 3-4
7. Bergseid,, M., et al. (1991), Strategies 4 34-35
8. Nelson, M., and McClelland, M. (1992), Methods Enzymol 216 279-303

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>> Licensing

U.S. Patent Nos. 7,176,004; 7,132,265; 7,045,328; 6,734,293; 6,713,285; 6,706,525; 6,489,150; 6,444,428; 6,391,548; 6,183,997; 5,948,663; 5,932,419; 5,866,395; 5,789,166; 5,707,841; 5,545,552; 5,512,468 and patents pending.

U.S. Patent Nos. 6,713,285; 6,391,548; 5,932,419; 5,789,166; Patents pending

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QuikChange XL Site-Directed Mutagenesis Kit, 30 rxn	200516	30 rxns	お問い合わせください	Call
The kit provides rapid and reliable method for site directed mutagenesis for large constructs.
Includes all necessary components required to perform 30 reactions. No additional purchase is required.
分析保証書 (C of A)　　マニュアル

QuikChange XL Site-Directed Mutagenesis Kit, 10 rxn	200517	10 rxns	お問い合わせください	Call
The kit provides rapid and reliable method for site directed mutagenesis for large constructs.
Includes all necessary components required to perform 10 reactions. No additional purchase is required.
分析保証書 (C of A)　　マニュアル