Affinity タンパク質発現と精製システム
掲載の製品はすべて試験研究用です。診断目的にご利用いただくことはできません。
用途
高レベルタンパク質発現に最高のシステムです
Affinity タンパク質発現・精製システムはおだやかな結合・溶出条件を簡単なプロトコルで実現できる、高レベルでのタンパク発現・精製方法です。このシステムには、カルモジュリン‐結合ペプチドタグ融合タンパク質を発現させるためのpCAL 発現ベクターと、カルモジュリンレジンから構成されており、個別での購入も可能です。Affinity CBP タンパク質検出キットを使用することで、CBP融合タンパク質を迅速に、高感度検出することも可能です。
簡単な精製
T7 RNAポリメラーゼによるタンパク質発現システムをベースとしたpCAL ベクターでは、目的のタンパク質はカルモジュリン結合ペプチド(CBP)タグに融合された形で発現されます。CBPでタグ化された融合タンパク質は、カルモジュリン・レジン中を1回通過させるだけで、ほぼ均一な状態に精製されます。CBPタグは、低濃度のカルシウム存在下でカルモジュリン・レジンに結合し、2 mM EGTA存在下の中性pH条件下で溶出されます。6xHIS 親和性タグを用いた場合のような厳しい溶出条件が不要です。ベクターの種類にもよりますが、トロンビンもしくはエンテロキナーゼ(EK)によるプロテアーゼ切断部位が発現タンパク質とタグの間にあるので、CBPタグを除去するさいに便利です。EKの場合、その認識部位のC-末端側で切断されるので、EKで処理することによって余分なアミノ酸を残すことなく、目的のタンパク質を精製することができます。
pCAL ベクター
選択法
E. coli ではアンピシリン耐性
クローニング部位
pCAL-n ベクター: BamH I、Sma I、EcoR I、Xba I、Nco I、Sal I、Xho I、Sac I、Hind III
プロモーター
T7/lacO プロモーター最高レベルのタンパク発現
pCALベクターは、タンパク質の発現レベルが高いことで定評のある、T7 RNAポリメラーゼをベースとしたpET-11シリーズのベクターに由来しています。すべてのpCALベクターには、T7/LacOプロモーターとプラスミド由来のlacIq遺伝子があり、大腸菌での厳密な発現コントロールが可能です。大腸菌BL21(DE3)もしくはBL21(DE3)pLysSにおいては、IPTGの存在下でT7 RNAポリメラーゼの発現が誘導されます。そのT7ポリメラーゼは、pCALベクターのT7プロモーターに結合し、転写を開始します。このpCALベクターを用いることで、C-末端あるいはN-末端にCBP親和性タグを融合させた目的のタンパク質を高レベルで発現させることが可能です。
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FLAG® Epitope-tag:
Manufactured under license from Sigma-Aldrich Co. under U.S. Patent Nos. 4,703,004, 4,782,137 and 4,851, 341. Other patents pending.
Anti-FLAG® antibody:
Purchased from Sigma for resale under license from Sigma-Aldrich Co. under U.S. Patent Nos. 4,703,004, 4,782,137 and 4,851,341. Other patents pending. FLAG® and Anti-FLAG® are registered trademarks of Sigma-Aldrich Co. M1, M2, and M5 are trademarks of Sigma-Aldrich Co. Use of this product is solely for investigational, experimental or research purposes. Not for commercial, diagnostic or therapeutic uses.
Product | Catalog # | Amount | Price | ||||||||||||||||
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