AdEasy™ アデノウイルス ベクター システム
掲載の製品はすべて試験研究用です。診断目的にご利用いただくことはできません。
AdEasy™ Adenoviral Vector Systemは、幅広い種類の細胞に感染してタンパク質を発現させる、組換えアデノウイルスの生産を簡単に行うことのできるシステムです。従来は組換えアデノウイルス・ベクターの構築に、アデノウイルス・ゲノムへの直接クローニングや、哺乳類細胞での相同組換えを利用した方法が採用されてきましたが、技術的困難を伴う、長時間かかるなどの問題点がありましたが、本システムでは相同組換えを大腸菌内で行うことにより簡単かつ短時間でベクターを構築可能です。
本システムでの組換えアデノウイルス・ベクターの構築は、次の2つのステップで完了します。まず、pShuttle Vector(シャトルベクター)の発現カセットに目的遺伝子をサブクローニングします。次に、目的遺伝子を含むシャトルベクターとpAdEasy-1 Vectorを大腸菌(BJ5183株)に同時に形質転換し、相同性組換えを誘発することにより、目的遺伝子を含む発現カセットをアデノウイルスのゲノム内へ移行させます。
構築された組換えアデノウイルス・ベクターを直鎖状にし、AD-293細胞にトランスフェクトすることにより、組換えアデノウイルスを生産します。
アデノウイルスは幅広いタイプの細胞に感染させることができ、ホスト細胞の細胞分裂に左右されません。哺乳類細胞でタンパク質を産生させるには、高効率の遺伝子デリバリーと高レベルの遺伝子発現が必要となりますが、どちらもアデノウイルス ベクターを用いることによって達成できます。アデノウイルス ベクターは高い発現レベルを持つので、哺乳類細胞における組み換えタンパク質の過剰発現に利用可能です。哺乳類細胞でタンパク質を発現させた場合には、目的タンパク質は適切な翻訳後修飾を受け、正しくフォールディングされますが、原核細胞をもちいたシステムでの過剰発現の場合には実現できないことです。
アジレント(旧ストラタジーン)は HEK 293 細胞の特別なサブタイプであり、粘着性が向上したAD-293 細胞を提供しています。この特別な表現型により、ウイルス パッケージングに優れた能力を発揮します。ウイルスの力価向上のために是非AD-293細胞をお試し下さい。
pAdEasy-1 ベクターは 33.4 kb のプラスミドで、ヒト アデノウイルス血清型 5(Ad5)ゲノムのほとんどの部分を含みますが E1 および E3遺伝子 を欠損しているので、標的細胞において自律的複製は起こりません。
pShuttle-CMV ベクターはCMVプロモーターとSV40ポリアデニル化シグナルとの間にマルチクローニング部位があり、目的遺伝子をクローニングすることができます。pShuttle ベクターは、目的遺伝子をCMV以外のプロモーターにより発現させる場合に使用するクローニング・ベクターです。いずれのシャトルベクターも、right arm, left arm領域でpAdEasy-1 との相同組換えが起こり、発現カセットがアデノウイルスゲノムに挿入されます。
pShuttle-IRES-hrGFP-1 、pShuttle-IRES-hrGFP-2も別途購入可能です。これらのベクターは CMVプロモーターとバイシストロン性の発現カセットを持っており、ひとつの転写産物から目的遺伝子とVitality ヒト化 Renilla GFP (hrGFP)を発現させることが可能です。目的遺伝子はFLAG® エピトープまたは 赤血球凝集素(HA) エピトープに融合可能です。
pShuttle-CMV のマルチクローニングサイトにlacZ 遺伝子が挿入されたコントロール用ベクターです。
ViraPack トランスフェクションキットは AdEasy XL とは別に提供しています。このキットはパッケージングの際に HEK293 細胞へプラスミドを形質転換するために特別に開発されました。
本ページ内のカタログ番号 200157 製品は「遺伝子組換え生物等の使用等 の規制による生物の多様性の確保に関する法律(通称カルタヘナ法)」に示されるところの「遺伝子組換え生物等」に該当する製品です。詳細に関してはアジレントテクニカルサービスへお問い合わせください。
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