Easy-A One-Tube RT-PCR System

Easy-A  One-Tube RT-PCR System

  • 便利な One-Tube仕様でコンタミネーションのリスクを低減し、ハイスループットに対応
  • Easy-A酵素により正確性の高い増幅とPCR産物の3'末端に-dAの付加を同時に実現
  • そのままTA/UAクローニングが可能
  • 5kbまでの増幅が可能
 
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高い正確性とTA/UAクローニング

Easy-A High-Fidelity PCR Cloning Enzymeを使用したOne-TubeでのRT-PCRキットです。このEasy-A酵素は、校正機能を備えながらPCR産物のTA/UAクローニングが可能な唯一のDNAポリメラーゼで、得られたPCR産物を直接StrataClone PCR Cloning Kitや他社のT-A/U-Aベクターを用いてPCRクローニングすることができます。

Easy-A酵素にはターミナル・トランスフェラーゼ活性があるため、Taq DNAポリメラーゼと同じようにPCR産物の3’-末端に-dAオーバー・ハングが付加されます。ただしTaqとは異なり、本酵素には3’から5’への校正機能があるので、PfuやPfuTurboと同程度の正確な増幅が可能です。本酵素で増幅したPCR産物では、他の校正機能を持つPCR酵素で必要なPCR後の-dA付加を行う操作は不要で、PCRの後でそのままクローニングすることが可能です。高効率でのPCRクローニングには、DNAトポイソメラーゼ Iを利用したStrataClone PCR Cloning Kitが便利です。

優れたパフォーマンスを示す2つの酵素の組み合わせ

Easy-A酵素にはArchaeMaxx Polymerase-Enhancing Factorが添加されているため、少量のテンプレートからでも効率よく増幅を行うことができ、10~200ngのTotal RNAもしくは0.1~10ngのpoly(A)+ RNAをテンプレートとして、0.1~6 kbまでの増幅が可能になっています。また、モノクローナル抗体によるホット・スタート仕様なので特異性が高く、室温でのセット・アップが可能です。

使用している逆転写酵素は遺伝子改変型MMLVで、少量のRNAサンプルからでも高感度での逆転写反応が可能になっています。45℃、30分の逆転写反応が最適ですが、1kb以下の場合は15分に短縮することができます。特異性を向上させたい場合やターゲットがGCリッチであるなど二次構造を形成するような場合は48℃で逆転写反応を行うことができます。また、ターゲットが低コピーの場合や4kb以上の場合には、42℃で逆転写反応を行うことで良好な結果が得られる場合があります。

便利なOne-Tube仕様

Easy-A One-Tube RT-PCR Systemは、特別に開発したバッファーを使用しているため、逆転写反応とPCRを一つのチューブで行うことができます。これにより、RNase等のコンタミネーションのリスクが低減するばかりでなく、同時に多くの検体を処理する際に非常に有用です。

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Our Easy-A PCR Cloning Enzyme Cloning Efficiencies RT-PCR amplification using Easy-A PCR cloning enzyme or Taq2000 DNA polymerase. Percentage recombinants value equals the number of white colonies per total number of colonies.
The Easy-A One –Tube RT-PCR kit performed with 100 ng input RNA. Lane 1 – 514bp Mouse ß-actin; lane 2 – 1.8kb Human Dystrophin; lane 3 – 4.1kb Mouse Complement; lane 4 – 5.9kb Human Dystrophin.

 
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Easy-A One-Tube RT-PCR System

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Reverse Transcriptase, Easy-A DNA polymerase, 10x RT-PCR optimized buffer, dNTP mix, RNase-free water
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