ZAP Express Vector

ZAP Express ベクター

  • 大腸菌および哺乳類細胞での発現が可能
  • In vivo excisionにより挿入された断片を含むファージミド・ベクターへ容易に変換
  • 未消化と消化済みベクターを提供
  • GigapackIII Gold packaging extracts、cDNA合成キットなどが付属したキットも提供
 
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用途

  • ファージミド・ベクターとして切り出し可能なラムダ・ファージ・ベクターを用いたcDNAライブラリーの構築
  • cDNAライブラリーの定方向クローニングによりタンパク質の効率的な発現
  • Sau3Aにより消化済みゲノムDNAおよび平滑末端PCR断片のクローニング
  • 細菌など小さいゲノム・サイズのライブラリーの構築
  • 比較的小さいサイズのゲノム断片(12 kb 以下)によるゲノム・ライブラリーの構築

挿入サイズ/部位

  • 12 kbまでのインサートを挿入可能
  • lacZ 遺伝子のN-末端領域に12ヵ所のクローニング・サイト

選択法

  • IPTG および X-gal 添加による青/白セレクション

スクリーニング法

  • ラムダ・ファージでは抗体および核酸プローブでのプラーク・スクリーニング
  • 哺乳類細胞での機能解析によるスクリーニングが可能
  • 大腸菌および哺乳類細胞での発現が可能

プロモーター/転写/発現

  • 大腸菌ではlac プロモーターの調節のもとで融合タンパクを発現
  • 哺乳類細胞ではCMVプロモーターにより発現
  • In vitro 転写のための T3 および T7 プロモーターを保有

プライマー

  • T3 20-mer、T7 22-mer、M13 [-20]、BK reverse、BKCMV

In Vivo Excision

ZAP Express ベクターは、Lambda ZAP ベクターと同様に、ラムダ・ベクター・システムの高いライブラリー構築効率とプラスミド・システムの汎用性とを兼ね備えています。ZAP Express ベクターにクローニングされたインサートは、ExAssist ヘルパーファージを利用したin vivo excisionにより、インサートを含むpBK-CMV ファージミド・ベクターとして簡単に切り出すことができます。ファージミド(プラスミド)・ベクターとして切り出した後は、通常の操作でサブ・クローニングなどを行うことができます。また、Rapid Excision キットを利用すれば、切り出し自体に要する作業時間わずか10分ほどです。pBK-CMVベクター はネオマイシン耐性遺伝子をもっているので、大腸菌はカナマイシン、哺乳類細胞はG418により選択可能です。

原核細胞での発現

大腸菌では lacZ プロモーターにより発現が制御されます。lacZ プロモーターはLacI の存在下で抑制され、IPTGの存在下で誘導されます。pBKポリリンカー部位はlacZプロモーターの下流に位置するベータ・ガラクトシダーゼ遺伝子のアルファー相補的部分のN末端に位置しているので、インサートを有するクローンの青/白スクリーニングを可能としています。インサートが挿入されていないベクターを含むコロニーまたはプラークは、X-gal およびIPTGの存在下では青色に発色します。これに対してインサートが挿入されているベクターを含むコロニーまたはプラークは白色(透明)となります。インサートを有するクローンはインサート遺伝子を融合タンパクとして発現するので、抗体を用いて発現の有無をスクリーニングすることができます。大腸菌ではカナマイシン耐性遺伝子はbla (ベータ・ラクタマーゼ)プロモーターにより発現されます。

真核細胞での発現

真核細胞ではZAP Express および pBK-CMV ベクターがもつCMV immediate early (最初期)プロモーター### により発現はされます。SV40ポリアデニル化配列は、転写終結およびポリアデニル化に必要なシグナルをもたらします。イントロンがインサートの下流側に配置されており、5' スプライシング部位は Kpn I 部位と T7 プロモーターの間に、また3' スプライシング部位はlacZ 配列の下流に位置します。ネオマイシン/カナマイシン耐性遺伝子の存在により、哺乳類細胞の安定なクローンの選択が可能となります。ネオマイシン/カナマイシン耐性遺伝子はSV40 early プロモーターとTK転写終結およびポリアデニル化シグナルにより発現されます。

品質管理

BamHI-およびEcoRI-消化済みベクター は、テスト・インサート使用時に1x107 pfu/µg DNAのファージを生産することが保証されています。EcoRI /XhoI-消化済みベクター は、テスト・インサート使用時に3x106 pfu/µg DNAのファージを生産することが保証されています。バックグラウンドは 1% 未満となります。

購入担当者へのご注意

ZAP Express ベクターは、アジレント(旧ストラタジーン)の米国特許Nos. 5,128,256, 5,286,636および欧州特許No. 286200 B1の対象となっています。このベクターのご購入の際には、このベクターを遺伝子のクローニング、発現および特性判定に利用することについて、その特許権限のもとでの有限の非排他的ライセンスが含まれています。このライセンスは以下のいかなる権限をも認めていません。

  • ZAP Express ベクターを、このベクターの複製、増幅、または修飾に用いること
  • ZAP Express ベクターまたはこれによるいかなる誘導体を再販すること、または
  • ZAP Express ベクターまたはこれによるいかなる誘導体を第三者に配布または移管すること

この他には、明文化、暗示または禁反言かどうかにかかわらず、ライセンスは認められません。ZAP Express ベクターの複製および/または修飾の許可可能性に関する定法については、アジレントのテクニカルサービスまたはお近くの代理店にお問い合わせください。

>>  Footnotes

  • 1. Short, J.M., et al. (1988), Nucleic Acids Res. 16: 7583-7600.
  • 2. Alting-Mees, M.A., et al. (1992), Strategies. 5: 58-61.

 
Product Catalog # Amount Price

ExAssist Helper Phage w/ XOLR

211203 1 ml お問い合わせください Call
For mass excision of libraries in ZAP Express or Lambda ZAP vectors, pCMV-Script or pBluescript phagemid will grow
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Rapid Excision Kit

211204 1 kit お問い合わせください Call
Lambda ZAP and ZAP Express vector excision in less than 10 minutes hands on time, Contains: 1 mL RE704 helper phage (~1 x 108 pfu/mL) XPORT and XLOLR E. coli strains
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ZAP Express Vector Kit

239201 1 kit お問い合わせください Call
Undigested vector, Contains: 20 µg undigested ZAP Express vector, Excision plating strain: XLOLR, Host Strain: XL1-Blue MRF', Helper Phage: R408, ExAssist helper phage
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ZAP Express EcoR I/CIAP-Treated Vector Kit

239211 1 kit お問い合わせください Call
ZAP Express vector predigested with EcoR I, and dephosphorylated to prevent self-ligation. Contains: 10 µg predigested ZAP Express Vector, Host Strain (XL1-Blue MRF'), Excision plating strain (XLOLR), Helper phages (R408, ExAssist phage)
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ZAP Express BamH I/CIAP-Treated Vector Kit

239212 1 kit お問い合わせください Call
ZAP Express vector predigested with BamH I, and dephosphorylated to prevent self-ligation. Contains: 10 µg predigested ZAP Express Vector, Host Strain (XL1-Blue MRF'), Excision plating strain (XLOLR), Helper phages (R408, ExAssist phage)
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ZAP Express EcoR II/Gigapack III Vector Kit

239614 1 kit お問い合わせください Call
Cloning kit featuring the ZAP Express vector provided pre-digested with EcoR I and Gigapack III Gold packaging extract, for the highest efficiency packaging. Contains: ZAP Express EcoR I/CIAP-Treated Vector Kit, 11 vials of Gigapack III Gold packaging extract, Gigapack controls
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ZAP Express BamH I/Gigapack III Vector Kit

239615 1 kit お問い合わせください Call
Cloning kit featuring the ZAP Express vector provided pre-digested with BamH I and Gigapack III Gold packaging extract, for the highest efficiency packaging. Contains: ZAP Express BamH I/CIAP-Treated Vector Kit, 11 vials of Gigapack III Gold packaging extract, Gigapack controls
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