pET Expression Systems

pET 発現システム

  • 厳密な遺伝子発現コントロールが可能
  • T7 RNAポリメラーゼによる発現系
  • 高レベルでのタンパク質発現を誘導  
  • BL21(DE3) および BL21(DE3)pLysS コンピテントセルが付属するシステムも販売
 
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遺伝子発現を厳密にコントロール

pET Expression Systemは、T7プロモーターとgene 10 リボゾーム結合部位の下流に目的の遺伝子配列をクローニングし、大腸菌で目的のタンパク質を発現させるシステムです。大腸菌の染色体に取り込まれたT7 RNAポリメラーゼは、IPTGの添加により、BL21(DE3)株ではlacUV5プロモーターにより発現が誘導されます。もしくは、ポリメラーゼを発現するバクテリオファージλCE6をBL21株に感染させることで発現が誘導されます。T7プロモーターの特異性により、T7ポリメラーゼをもたない大腸菌ホスト内での目的タンパク質の発現レベルは非常に低く抑えられますが、IPTGによる誘導条件下ではT7 RNAポリメラーゼが誘導され、高いレベルでの転写産物の発現が生じます。

クローニング部位

pET-3a、b、c および pET-11a、b、c: Nde I、BamH I

pET-3d と pET-11d: Nco I、BamH I

pET-3 と pET-11 ベクターは3つの読み枠全てに BamH I 部位を含んでいます。

タンパク質発現システム

pETと大腸菌の組み合わせは、in vivoでのバクテリア発現システムとして広く用いられています。その理由は、バクテリオファージのT7プロモーター配列によるT7 RNAポリメラーゼの厳密な発現コントロール、T7 RNAポリメラーゼの高い活性、そしてT7 gene 10転写開始シグナルによる高い転写効率があげられます。アジレント(旧ストラタジーン)のpET Expression Systemには、最適な発現レベルが得られるpETをベースにしたベクターのほかに、ほとんどのタンパク質発現に適したBL21(DE3)株、毒性の高いタンパク質の発現に適したBL21(DE3)pLysS株が付属しており、とても使いやすくなっています。

pET-3 ベクター と pET-11 ベクター

より厳密に発現をコントロールするために、pET-11 ベクターでは lac オペレーターが T7 プロモーターと翻訳開始配列の間に挿入されています。これにより、IPTGの非存在下では発現が抑制されます。IPTGの添加により抑制の解除が起こると共に、DE3を含む菌株では lacUV5 プロモーターから T7 ポリメラーゼの発現が誘導されます。lacIq 遺伝子は pET-11 プラスミドに含まれており、これによって T7 ポリメラーゼ遺伝子発現と T7 プロモーター転写を停止するのに十分な LacI リプレッサータンパク質が供給されます。高レベルの発現とその発現タンパク質の1カラムでの精製には、Affinity タンパク質発現と精製システムをご覧下さい。

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Multiple Cloning Site Sequences

>>  Footnotes

  • 1. Borck, K., et al. (1976), Mol. Gen. Genet. 146: 199.
  • 2. Weiner, M.P., et al. (1994), Strategies. 7: 41-43.
  • 3. Studier, F.W., et al.  (1990), Methods Enzymol. 185: 60-89.
  • 4. Studier, F.W. and Moffatt, B.A. (1986), J. Mol. Biol. 189: 113-130
  • 5. Phillips, T.A., VanBogelen, R.A. and Neidhardt, F.C. (1984), J. Bacteriol. 159: 283-287.

 
Product Catalog # Amount Price

pET-3 a-d Vectors

211521 1 kit お問い合わせください Call
Contains T7 promoter, 20 µg each of pET-3a, pET-3b, pET-3c and pET-3d
分析保証書(C of A) 分析保証書 (C of A)   マニュアル マニュアル

pET-11a-d Vectors

211523 1 kit お問い合わせください Call
Contains T7/lacO promoter and lacl gene, 20 µg each of pET-11a, pET-11b, pET-11c and pET-11d
分析保証書(C of A) 分析保証書 (C of A)   マニュアル マニュアル

pET-3 a-d Expression system

211621 1 kit お問い合わせください Call
pET-3 vectors contain T7 promoter, Contents: 20 µg each pET-3a, pET-3b, pET-3c, pET-3d vectors, 5 x 0.2 mL BL21(DE3) cells, 5 x 0.2 mL BL21(DE3)pLysS cells
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pET-11 a-d Expression System

211623 1 kit お問い合わせください Call
pET-3 vectors contain T7/lacO promoter and lacl gene, Contents: 20 µg each pET-11a, pET-11b, pET-11c, pET-11d vectors, 5 x 0.2 mL BL21(DE3) cells, 5 x 0.2 mL BL21(DE3)pLysS cells
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