LacSwitch II 哺乳類発現制御システム
掲載の製品はすべて試験研究用です。診断目的にご利用いただくことはできません。
用途
クローニング・サイト
pOPRSVI/MCS: 次の8ヵ所の特異なサイトが含まれています - Kpn I、Xho I、Cla I、EcoR V、Sma I、Spe I、Xba I および Not I
pOPI3CAT: RSVプロモーターの除去用の特異サイト、標的遺伝子の挿入用の特異な Not I サイト
プロモーター:
pCMVLacI: CMV; pOPRSVI/MCS aおよびpOPI3CAT: RSV-LTR
選択法
pCMVLacI: 真核細胞においてハイグロマイシン耐性、E. coli ではアンピシリン耐性
pOPRSVI/MCS および pOPI3CAT: 真核細胞ではネオマイシン耐性、E. coli ではアンピシリン耐性
改良システム
LacSwitch II 誘導可能哺乳類発現システムは、pOPI3CAT、pCMVLacI および pOPRSVI/MCS ベクターから構成されています。pCMVLacI ベクターにより産生される Lac リプレッサー・タンパク質が、pOPI3CAT および pOPRSVI/MCS ベクターの特異的DNA配列(オペレーター)に結合すると転写が妨害されます。IPTGは、真核細胞に対する悪影響もなく、このオペレーター配列に対する Lac リプレッサータンパク質の結合親和性を低下させて、挿入遺伝子の転写および発現を開始させます。LacSwitch II システムならば、標的遺伝子の誘導を4~8時間以内に実現します。
厳密なリプレッション
pCMVLacI ベクターは、CMVプロモーターの強度により対象遺伝子を強力に抑制します。lac I 遺伝子が高度に発現されると、標的遺伝子が厳密に抑制されます。核局在配列 (NLS) は、Lac リプレッサーの発現を核側に向けます。
対象遺伝子の定方向挿入
定方向クローニングを促進するために、pBluescript II SK のマルチクローニング部位を pOPRSVI に装備しました。これによって得られた pOPRSVI/MCS ベクターにより、標的遺伝子の定方向挿入が可能となり、スクリーニングに必要な時間が短縮されます。pOPRSVI/MCS ベクターのMCSのいずれかの末端に T3 および T7 プロモーターが存在することにより、T3 および T7 プライマーによるポジティブ・インサートのシークエンシングと確認とが容易になります。
RSV プロモーターの除去
研究対象のプロモーターをRSV-LTR プロモーターの代わりに用いるために、LacSwitch II システムには pOPI3CAT オペレーター ベクターが含まれています。このベクターにはRSVプロモーターを除去できるよう、イントロンに3個のオペレーターと特異な制限酵素サイトが含まれています。
1. DuCoeur, L.C., Wyborski, D.L., and Short, J.M. (1992), Strategies. 5:70-72.
2. Wyborski, D.L., and Short, J.M. (1991), Nucleic Acids Res. 191: 4647-4653.
3. Fieck, A., Wyborski, D.L., and Short, J.M. (1992), Nucleic Acids Res. 20: 1785.
4. Wyborski, D.L., DuCoeur, L.C., and Short, J.M. (1996), Environ. Mol. Mut. 28: 447-458
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